[发明专利]一种高效稳定表达抑制性抗体的CAR‑T细胞及其用途

权利要求书

1.一种转基因T细胞，其特征在于，所述T细胞基因组中稳定整合了含编码嵌合抗原受体与免疫检查点抑制性抗体的核酸序列的表达框，且表达框的两端包含转座子的反向末端重复序列。

2.如权利要求1所述的转基因T细胞，其特征在于，每百万个所述T细胞在48小时的时间内表达的抗体量高于2μg。

3.如权利要求1所述的转基因T细胞，其特征在于，所述转座子选自：piggybac、sleeping beauty、frog prince、Tn5和Ty；优选地，所述转座子为piggybac。

4.如权利要求1所述的转基因T细胞，其特征在于，所述激活型抗体选自：抗体全长序列或其功能性片段；优选地，选自：Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、scFv和scFv-Fc；进一步优选地，所述抗体为scFv-Fc。

5.如权利要求1所述的转基因T细胞，其特征在于，所述嵌合抗原受体针对如下抗原中的一种或多种：CD19、CD20、CEA、GD2(又称B4GALNT1，β1,4-乙酰基-氨基半乳糖基转移酶1)、FR(Flavin还原酶)、PSMA(前列腺特异性膜抗原)、PMEL前黑素小体蛋白)、CA9(碳酸酐酶IX)、CD171/L1-CAM、IL-13Rα2、MART-1(又称粘蛋白-A)、ERBB2、NY-ESO-1(又称CTAG1B，癌/睾丸抗原1B)、MAGE(黑素瘤相关抗原E1)家族蛋白、BAGE(B黑素瘤抗原家族)家族蛋白、GAGE(生长激素释放因子)家族蛋白、AFP(α-胎蛋白)、MUC1(mucin 1，细胞表面相关)、CD22、CD23、CD30、CD33、CD44v7/8、CD70、VEGFR1、VEGFR2、IL-11Rα、EGP-2、EGP-40、FBP、GD3(又称ST8SIA1，ST8α-N-乙酰基-神经酰胺α-2,8-唾液酸转换酶1)、PSCA(前列腺干细胞抗原)、FSA(又称KIAA1109)、PSA(又称KLK3，激肽释放酶相关的肽酶3)、HMGA2、胎儿型乙酰胆碱受体、LeY(又称FUT3)、EpCAM、MSLN(间皮素)、IGFR1、EGFR、EGFRvIII、ERBB3、ERBB4、CA125(又称MUC16，mucin 16，细胞表面相关)、CA15-3、CA19-9、CA72-4、CA242、CA50、CYFRA21-1、SCC(又称SERPINB3)、AFU(又称FUCA1)、EBV-VCA、POA(又称VDR，维生素D(1,25-二氢维生素D3)受体)、β2-MG(β-2-微球蛋白)和PROGRP(GRP胃泌素释放肽)；优选地，所述嵌合抗原受体为针对EGFR家族的嵌合抗原受体。

6.如权利要求1所述的转基因T细胞，其特征在于，所述转基因T细胞还包含刹车分子，该刹车分子为可被已上市抗体药物识别的膜抗原；优选地，所述膜抗原选自CD11a、CD15、CD19、CD20、CD25、CD44、CD47、CD52、EGFR、ERBB2、ERBB3、ERBB4、VEGFR1、VEGFR2、EpCAM、MSLN、GPIIb/IIIa、α4整合素和α4β7整合素；优选地，所述膜抗原为CD20。

7.如权利要求1所述的转基因T细胞，其特征在于，所述免疫检查点抑制性抗体针对如下抗原中的一种或多种：PD-1、CTLA4、PDL1、PDL2、PDL3、TIM3、LAG3、CD47、BTLA、TIGIT、CD160、LAIR1、B7-H1、B7-1、VSIR和CD244；优选地，所述抗体为抗PD-1抗体。

8.如权利要求1-7中任一项所述的转基因T细胞，其特征在于，所述转基因杀伤性细胞转入了以下核酸构建物C：

核酸构建物C：含有转座子5’反向末端重复序列(5’ITR)，编码任选的刹车分子、嵌合抗原受体(CAR)和抑制性抗体的核酸序列及控制该核酸序列表达的启动子，polyA加尾信号序列，转座子3’反向末端重复序列(3’ITR)，转座酶编码序列和控制转座酶编码序列表达的启动子；

任选地，采用病毒转导、显微注射、粒子轰击、基因枪转化和电转中的一种或多种方法将所述核酸构建物转入所述细胞中，优选地采用电转。

9.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物含有权利要求1-8中任一项所述的转基因T细胞和药学上可接受的辅料。