[发明专利]一种高效稳定表达抗体的NK细胞及其用途

说明书

技术领域

本发明属于细胞生物学和肿瘤学领域，涉及一种高效稳定表达抗体的NK细胞及其用途。

背景技术

癌症现在已成为人类健康的头号杀手，快速的生活节奏、巨大的工作压力、不健康的饮食习惯、糟糕的环境都是癌症发生的帮凶，使得癌症的高发率和年轻化趋势也越来越明显。目前传统治疗手段疗效已到瓶颈，亟需探索一个更加有效的治疗方法，来提高癌症患者的生存率和生存质量。针对恶性肿瘤的免疫治疗近年来发展迅速，取得令人瞩目的临床疗效。2011年，Nature及临床肿瘤最顶级杂志JCO分别发表相同题目“肿瘤免疫治疗的时代已经来临”的评论文章(Nature.2011；480(7378):480；J Clin Oncol.2011；29(36):4828)，肿瘤免疫细胞治疗迎来新一轮的研究高潮，未来有可能在肿瘤治疗中占据相当重要的地位。

“免疫作用”可分为细胞免疫及体液免疫，两者具有截然不同杀灭肿瘤或病毒的方式。细胞免疫是以细胞直接发挥效应来清除异物，它是机体免疫应答的参与者，也是免疫功能的执行者。目前用于临床治疗的效应免疫细胞主要包括细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine activated killer cells，CIK)、自然杀伤细胞(Natural killer，NK)、淋巴因子激活的杀伤细胞(lymphokine activated killer cell，LAK)、树突状细胞刺激的细胞因子诱导的杀伤细胞(DC-CIK)、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)、γδT细胞、肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte，TIL)等。

NK细胞是重要的免疫效应细胞，主要参与免疫监视，消除异常细胞(包括恶性转化的细胞，病毒感染的细胞，抗体约束的细胞)以及受胁迫的细胞，而不破坏健康和正常的“自身”细胞。MHC-I分子几乎在每一个细胞上表达，当作是体内的“自我”标志，这些细胞不会受到NK细胞活性影响。许多异常肿瘤或病毒感染的细胞会减少细胞表面MHC-I分子的表达，以逃避细胞毒性T淋巴细胞(CTL)作用，但这些异常细胞会因耐受MHC-I配体的不存在而易受NK细胞介导的杀伤作用。

NK细胞是定义为表型为CD3-CD56+的淋巴细胞，属于固有免疫应答细胞，其杀伤活性不受细胞MHC限制，能快速溶解靶细胞。与CD8+的毒性T淋巴细胞不同，NK细胞的抗肿瘤毒性不需要事先致敏，并且还可以消除MHC-I阴性的细胞。NK细胞是一个非常安全的效应细胞，因为他们可以避免细胞因子风暴、肿瘤溶解综合症。NK细胞作为肿瘤免疫治疗，目的是使用不同方法(如使用异体NK细胞或者细胞系、基因修饰NK细胞或者细胞系)来克服NK细胞麻痹，特别是采用嵌合抗原受体修饰的NK细胞，可有效的提高NK细胞的抗肿瘤效应。NK细胞因为不需要进行HLA配型，因此也被认为是肿瘤免疫治疗中和T细胞有同样应用价值的细胞类型。临床试验显示，异体NK细胞在患者体内能存活数周甚至数月。

NK细胞来源有：外周血(PB)、无刺激的白细胞单采产品(PBSC)、脐带血(UCB)、骨髓(BM)、人胚胎干细胞(hESCs)以及诱导性多能干细胞(iPCSs)。目前认为NK细胞主要通过以下途径发挥杀伤作用：1、NK细胞直接通过胞吐作用释放穿孔素和颗粒酶等细胞毒性颗粒，活化caspase途径诱导靶细胞凋亡；2、活化NK细胞表达Fas(CD95)配体和TRAIL(TNF related apoptosis inducing ligand)分子，诱导CD95+靶细胞和TRAIL受体阳性的靶细胞通过内源酶的级联反应发生凋亡；3、细胞因子介导的杀伤作用，NK细胞能合成和分泌多种细胞因子，如IFNγ、TNFα、IL1、IL5、IL8、IL10和GCSF；4、ADCC作用。

体液免疫是由抗体所介导产生作用，人体内的抗体是由B淋巴细胞产生。1997年，第一个用于临床癌症治疗的单抗——抗人CD20(rituximab)获得FDA批准。随着抗体技术的发展，至今全球已报道的抗体有10多万种，其中基因工程抗体有1000多种，人源化抗体200多种。截止2016年3月，FDA至今已批准50个抗体上市，其中26个用于肿瘤治疗，这些抗体既有作用于肿瘤细胞本身直接发挥作用，也有作用于免疫细胞间接发挥作用。