[发明专利]一种高效稳定表达抗体的NK细胞及其用途

权利要求书

1.一种转基因NK细胞，其特征在于，所述NK细胞的基因组中稳定整合了包含人Fc段的抗体的编码序列的表达框，且表达框的两端包含转座子的反向末端重复序列。

2.如权利要求1所述的转基因NK细胞，其特征在于，每百万个所述NK细胞在48小时内表达的抗体量高于2μg。

3.如权利要求1所述的转基因NK细胞，其特征在于，所述转座子选自：piggybac、sleeping beauty、frog prince、Tn5和Ty；优选地，所述转座子为piggybac。

4.如权利要求1所述的转基因NK细胞，其特征在于，所述NK细胞选自：原代NK细胞、NK细胞株和NKT细胞；优选地，所述NK细胞为原代NK细胞。

5.如权利要求1所述的转基因NK细胞，其特征在于，所述NK细胞还包含刹车分子，该刹车分子为可被已上市抗体药物识别的膜抗原；优选地，所述膜抗原选自CD11a、CD15、CD19、CD20、CD25、CD44、CD47、CD52、EGFR、ERBB2、ERBB3、ERBB4、VEGFR1、VEGFR2、EpCAM、MSLN、GPIIb/IIIa、α4整合素和α4β7整合素；优选地，所述膜抗原为CD20。

6.如权利要求1所述转基因NK细胞，其特征在于，所述抗体为抗肿瘤或抗病毒的抗体，优选自：免疫检查点抗体、T细胞共刺激信号抗体、抗新生血管生成的抗体、抗肿瘤细胞生长因子受体的抗体、抗肿瘤细胞膜抗原的抗体和抗病毒抗体。

7.如权利要求1所述的转基因NK细胞，其特征在于，所述抗体针对如下抗原中的一种或多种：EGFR、EGFRvIII、ERBB2、ERBB3、ERBB4、MUC1(粘蛋白1，细胞表面相关的)、CD19、CD20、CD22、CD23、CD30、CD33、CD44v7/8、CD70、VEGFR1、VEGFR2、IL-11Rα、EGP-2、EGP-40、FBP、GD3(又称ST8SIA1，ST8α-N-乙酰基-神经酰胺α-2,8-唾液酸转换酶1)、PSCA(前列腺干细胞抗原)、FSA(又称KIAA1109)、PSA(又称KLK3，激肽释放酶相关的肽酶3)、HMGA2、胎儿型乙酰胆碱受体、LeY(又称FUT3)、EpCAM、MSLN(间皮素)、IGFR1、CA125(又称MUC16，粘蛋白16，细胞表面相关)、CA15-3、CA19-9、CA72-4、CA242、CA50、CYFRA21-1、SCC(又称SERPINB3)、AFU(又称FUCA1)、EBV-VCA、POA(又称VDR，维生素D(1,25-二氢维生素D3)受体)、β2-MG(β-2-微球蛋白)和PROGRP(GRP胃泌素释放肽)、GD2(又称B4GALNT1，β1,4-乙酰基-氨基半乳糖基转移酶1)、FR(Flavin还原酶)、PSMA(前列腺特异性膜抗原)、gp100(PMEL前黑素小体蛋白)、CA9(碳酸酐酶IX)、CD171/L1-CAM、IL-13Rα2、MART-1(又称melan-A)、NY-ESO-1(又称CTAG1B，癌/睾丸抗原1B)、MAGE(黑素瘤相关抗原E1)家族蛋白、BAGE(B黑素瘤抗原家族)家族蛋白、GAGE(生长激素释放因子)家族蛋白、AFP(α-胎蛋白)、CEA、PD-1、CTLA4、PDL1、PDL2、PDL3、TIM3、LAG3、CD28、CD137、CD40、CD40L、CD47、乙肝病毒和艾滋病毒；优选地，所述抗体为HER2抗体。

8.如权利要求1-8中任一项所述的转基因NK细胞，其特征在于，所述转基因NK细胞转入了以下核酸构建物A和B：

核酸构建物A：含有转座子5’反向末端重复序列(5’ITR)、包含人Fc段的抗体的编码序列及控制该核酸序列表达的启动子、polyA加尾信号序列和转座子3’反向末端重复序列(3’ITR)；

核酸构建物B：含有转座子5’反向末端重复序列(5’ITR)、编码刹车分子的核酸序列及控制该核酸序列表达的启动子、polyA加尾信号序列、转座子3’反向末端重复序列(3’ITR)、转座酶编码序列和任选的控制转座酶编码序列表达的启动子；

任选地，采用病毒转导、显微注射、粒子轰击、基因枪转化和电转中的一种或多种方法将所述核酸构建物转入所述细胞中，优选地采用电转。