[发明专利]抗FGFR2-IIIc单克隆抗体、杂交瘤细胞株和应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程和免疫学技术领域，更具体地，涉及单克隆抗体技术领域，特别是指一种抗FGFR2-IIIc单克隆抗体、相关杂交瘤细胞株和应用。

背景技术

成纤维细胞生长因子受体2(Fibroblast Growth Factor Receptors2，FGFRs)是一类跨膜的酪氨酸激酶受体，由胞外区、跨膜区和胞浆区三部分组成。FGFR2介导成纤维细胞生长因子家族(Fibroblast Growth Factors，FGFs)信号传递入胞内。FGFs信号通路对多种细胞的增殖、分化以及凋亡具有强烈调节作用。前列腺癌、乳腺癌、肺癌、肝癌、胃癌、黑色素瘤等多种肿瘤细胞均可表达FGF。

FGFR2基因由于编码胞外第三个Ig样环(loop-III)的内含子-外显子区域的选择性剪接产生FGFR2-IIIb(SEQ ID NO.5)和FGFR2-IIIc(SEQ ID NO.4)两种蛋白异构体，因此loop-III决定了这两种蛋白异构体的配体结合特异性。前列腺癌(Prostate cancer CaP)是男性生殖系统常见的一种恶性肿瘤，在40岁之后其发病率随着年龄增长而增加。因此随着人类平均寿命的延长、诊断技术的不断提高，前列腺癌的发病率也在不断上升。前列腺癌从雄性激素敏感到雄性激素不敏感肿瘤的演变过程在大鼠模型中伴随着FGFR2可变剪接体的改变。这个改变导致FGFR2-IIIb异构体的丢失，而存在大量的FGFR2-IIIc异构体。FGFR2-IIIc异构体在前列腺癌中表达的临床相关性已经在几个研究中揭示。Leung(Leung HY,Mehta P,Gray LB,Collins AT,Robson CN and Neal DE.1997.Oncogene 15(9):1115-20.Keratinocyte growth factor expression in hormone insensitive prostate cancer.)等报道65％的CaP都有FGFR2-IIIc的表达，但是在良性前列腺增生(BPH)中并未检测到其表达。相反，IIIb在大多数良性肿瘤(76％)包括BPH中都有表达。Kwabi-Addo(Kwabi-Addo B,Ozen M and Ittmann M 2004.Endocrine-Related Cancer 11 709-724.The role of fibroblast factors and their receptors in prostate cancer.)等通过免疫组化采用一种多克隆抗体检测到了FGFR2-IIIc在前列腺癌组织间质细胞中的表达。Sahadevan(Sahadevan K,Darby S,Leung HY,Mathers ME,Robson CN and Gnanapragasam VJ.2007.J Pathol.213(1):82-90.Selective over-expression of fibroblast growth factor receptors 1and 4in clinical prostate cancer.)等通过激光捕获显微切割138列恶性CaP的组织微阵列前列腺上皮细胞。这些分析表明在在恶化的上皮细胞中主要表达的异构体由FGFR2-IIIb向FGFR2-IIIc转变。这些新的临床数据与先前的研 究结果是一致的，FGFR2异构体由IIIb向IIIc转变是前列腺癌演变的一个标志。FGFR2异构体由IIIb向IIIc转变所伴随着的表型改变定义为上皮间质转化(EMT)。EMT提高了细胞的迁移和侵入，方便了多个癌瘤类型的转移。

以FGFR2-IIIc异构体作为治疗靶标阻断肿瘤的演变，该研究通过在小鼠膀胱癌模型中对FGFR2-IIIc基因进行基因沉默和基因敲除。利用反义RNA下调IIIc的表达使小鼠存活率从0％上升到50％(持续50天)，并且下调了肿瘤向肺和骨的转移。先前的研究表明FGFR2-IIIc在上皮癌中表达，FGFR2-IIIc在前列腺癌的EMT中起着决定和驱动的作用(Chaffer CL,Brennan JP,Slavin JL,Blick T,Thompson EW Williams ED.2006.Cancer Res.66:11271-11279Mesenchymal-to-Epithelial Transition Facilitates Bladder Cancer Metastasis:Role of Fibroblast Growth Factor Receptor-2.)。