[发明专利]一种猪肺炎支原体的制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种猪肺炎支原体的制备方法，以及其制备的疫苗组合物和应用，属于生物技术领域。

背景技术

猪支原体肺炎是由猪肺炎支原体引发的一种慢性肺炎，长期以来，本病一直被认为是对养猪业造成重大经济损失、且最常发生、流行最广、最难净化的重要疫病之一。当猪肺炎支原体伴有其他病原混合感染或继发感染时，表现为呼吸困难、发热、死亡等；反之，未伴有其他病原体时，病情显得较为简单，呈现亚临床症状，表现为慢性无痰干咳、平均日增重下降和饲料转化率降低。近几年来，通过使用药物和疫苗以及合理的管理方法大大的减轻了猪地方性肺炎对猪群肺组织的损害，但本病仍然广泛流行于世界各地，给全球养猪业仍然造成了非常严重的经济损失。国外许多养猪业发达的国家已对猪肺炎支原体的流行病学进行了调查，表明30％-100％的育肥猪都表现为猪肺炎支原体血清抗体阳性，屠宰场的流行病学资料显示38％-100％猪群都感染了猪肺炎支原体。

采用疫苗进行免疫预防是国内外控制猪肺炎支原体感染的根本手段。猪肺炎支原体的培养困难较大，传统培养方式耗时长、抗原滴度低，是目前猪肺炎支原体疫苗规模化生产的技术瓶颈。

发明内容

针对现有技术中猪肺炎支原体疫苗生产的难题，本发明对猪肺炎支原体的培养方式和疫苗制备方法进行研究，实现了在不增加成本的情况下，大大提高了疫苗的免疫效果，能够有效地预防猪肺炎支原体的感染。

本发明涉及一种猪肺炎支原体的制备方法，其制备的猪肺炎支原体的抗原，具有大大提高疫苗的免疫效力的效果，所述猪肺炎支原体的制备方法包括：步骤(1)使用液体培养基扩增培养猪肺炎支原体或其培养物进入稳定期；步骤(2)调节所述液体培养基pH值为7.2-7.6；以及步骤(3)继续培养所述猪肺炎支原体至液体培养基pH值下降为6.8-7.0。

本发明还涉及一种疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包括免疫量的所述制备方法制备的猪肺炎支原体的抗原和药学上可接受的载体。

本发明还涉及所述疫苗组合物在制备预防和治疗猪支原体肺炎和猪肺炎支原体感染相关疾病的药物中的应用。

附图说明

图1为根据不同培养时间点活菌含量绘制的猪肺炎支原体的生长曲线。

具体实施方式

以下，对本发明的实施方式进行说明。

“稳定期”意指微生物在恒定体积的液体培养基中培养，以细胞对数值为纵坐标，培养时间为横坐标的生长曲线上，生长速率常数等于0的时期，体系处于新繁殖的细胞数与衰亡的细胞数相等，或正生长与负生长相等的动态平衡中。

“培养物”是病毒的不同代次传代培养物，本领域技术人员知晓不同代次之间其基因序列仅可能会发生微小的变异。

本发明涉及一种猪肺炎支原体的制备方法，其中，所述猪肺炎支原体的制备方法包括：步骤(1)使用液体培养基扩增培养猪肺炎支原体或其培养物进入稳定期；步骤(2)调节所述处于稳定期的液体培养基pH值为7.2-7.6；以及步骤(3)继续培养所述猪肺炎支原体至液体培养基pH值下降为6.8-7.0。

作为本发明的一种实施方式，所述液体培养基的配方为(按1065mL计)：牛心浸液(BD公司)300mL，ddH2O 360mL，调pH值到7.4，121℃高压灭菌15min。再加入下列过滤除菌的成分：Hank’s平衡盐溶液(10×)40mL，0.25％(W/V)酚红10mL，灭活马血清200mL，5％(W/V)水解乳蛋白100mL，25％(W/V)酵母浸出液20mL，10000IU/mL青霉素10mL，1％醋酸铊溶液25mL。

作为本发明的一种实施方式，本发明的猪肺炎支原体的制备方法中，所述步骤(1)中所述扩增培养猪肺炎支原体进入稳定期时所述液体培养基pH值下降为6.8-7.0。

作为本发明的一种实施方式，本发明的猪肺炎支原体的制备方法中，所述步骤(2)中调节所述处于稳定期的液体培养基pH值为7.4。

作为本发明的一种实施方式，本发明的猪肺炎支原体的制备方法中，所述步骤(3)中继续培养所述猪肺炎支原体0.5天以上。

作为本发明的一种实施方式，本发明的猪肺炎支原体的制备方法中，所述步骤(3)中继续培养所述猪肺炎支原体0.5天-2天。

作为本发明的一种实施方式，本发明的猪肺炎支原体的制备方法中，所述步骤(1)中使用液体培养基扩增培养所述猪肺炎支原体或其培养物为多级培养。

作为本发明的一种实施方式，本发明的猪肺炎支原体的制备方法中，所述步骤(1)中使用液体培养基扩增培养所述猪肺炎支原体或其培养物为三级培养。