[发明专利]一种猪肺炎支原体的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种猪肺炎支原体的制备方法，其中，所述猪肺炎支原体的制备方法包括：

步骤(1)使用液体培养基扩增培养猪肺炎支原体或其培养物进入稳定期；

步骤(2)调节所述处于稳定期的液体培养基pH值为7.2-7.6；以及

步骤(3)继续培养所述猪肺炎支原体至液体培养基pH值为6.8-7.0。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述步骤(1)中所述扩增培养猪肺炎支原体或其培养物进入稳定期时所述液体培养基pH值下降为6.8-7.0。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述步骤(2)中调节所述处于稳定期的液体培养基pH值为7.4。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述步骤(3)中继续培养所述猪肺炎支原体0.5天以上；优选地，所述步骤(3)中继续培养所述猪肺炎支原体0.5天-2天。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述步骤(1)中使用液体培养基扩增培养所述猪肺炎支原体或其培养物为多级培养；优选地，所述步骤(1)中使用液体培养基扩增培养所述猪肺炎支原体或其培养物为三级培养。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其中，使用液体培养基扩增培养所述猪肺炎支原体或其培养物制备一级种子的菌种接种量为5％-15％，所述制备一级种子的培养完成时液体培养基pH值为6.8-7.0，制备二级种子的一级种子接种量为3％-8％，所述制备二级种子的培养完成时液体培养基pH值为6.8-7.0，使用二级种子扩增猪肺炎支原体的接种量为3％-8％，所述扩增猪肺炎支原体的培养完成时液体培养基pH值为6.8-7.0；优选地，使用液体培养基扩增培养所述猪肺炎支原体或其培养物制备一级种子的菌种接种量为10％，制备一级种子的培养时间为3-7天，制备二级种子的一级种子接种量为5％，制备二级种子的培养时间为3-7天，使用二级种子扩增猪肺炎支原体的接种量为5％，扩增猪肺炎支原体的的培养时间为3-7天。

7.一种疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包括免疫量的权利要求1～5任一项所述制备方法制备的猪肺炎支原体的抗原和药学上可接受的载体。

8.根据权利要求7所述的疫苗组合物，其中，所述猪肺炎支原体的抗原包括灭活的全支原体抗原和裂解的支原体抗原；优选地，所述猪肺炎支原体的抗原包括所述猪肺炎支原体HN0613株或GZ株灭活的全支原体抗原和裂解的支原体抗原；优选地，所述猪肺炎支原体的抗原含量为灭活前≥10^7.0CCU/ml，更优选地含量为10^7.0～10^10.0CCU/ml。