[发明专利]唾液抗线粒体抗体M2型的酶联免疫检测试剂盒

权利要求书

1.一种唾液抗线粒体抗体M2型的酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒中包括下述组分：

AMA-M2标准品；

M2抗原包被的聚苯乙烯ELISA微孔板；

酶标二抗：辣根过氧化物酶标记的抗人IgG；

样本稀释液：质量浓度0.1％的BSA-PBS溶液；

辅助试剂：底物显色液、反应终止液和清洗缓冲液；

所述样本稀释液的配制方法为：取牛血清白蛋白1g，加入pH7.4的0.01M磷酸盐缓冲溶液1L，充分溶解；

所述底物显色液为TMB/H₂O₂，是通过下述方法配制获得：

(1)配制底物显色液A：

取四甲基联苯胺20mg、DMSO 2ml、EDTA-Na 20mg、柠檬酸95mg、甘油5ml，以ddH₂O定容至50ml后混匀，避光保存；

(2)配制底物显色液B：

取醋酸钠1.36g、柠檬酸0.16g、30％过氧化氢30ul，以ddH₂O定容至50ml后混匀；

(3)使用前，将底物显色液A、B液等体积混匀，即得底物显色液TMB/H₂O₂；

所述反应终止液为：0.5M硫酸；

所述清洗缓冲液是质量浓度0.05％的Tween20-PBS溶液；其配制方法为：取吐温20500ul，加入pH7.4的0.01M磷酸盐缓冲溶液1L，充分溶解。

2.权利要求1所述试剂盒的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将获取的唾液样本离心后吸取上清，用0.1％BSA-PBS溶液按1∶40的体积比稀释；

(2)用样本稀释液稀释AMA-M2标准品为8个梯度：AMA-M2含量分别为1RU/ml、0.50RU/ml、0.25RU/ml、0.125RU/ml、0.0625RU/ml、0.03175RU/ml、0.015625RU/ml、0RU/ml；第8个0RU/ml设为空白对照孔，直接采用样本稀释液；

(3)在M2抗原包被的聚苯乙烯ELISA微孔板中分别加入100ul稀释好的标准品和样本，室温孵育30分钟；弃去孔中液体，每孔加300ul配好洗液，60秒后将微孔板中液体倒出，并在吸水纸上拍打去除残留液体，重复清洗3次；

(4)每孔加入100ul酶标二抗，室温孵育30分钟后，弃去孔中液体，清洗3次；

(5)每孔加入100ul显色液，室温孵育15分钟，再以加显色液的相同顺序加入100ul终止液终止反应；

(6)用酶标仪在450nm波长读取OD值，以450nm平均吸光值为横坐标，各标准品浓度为纵坐标，绘制标准曲线，根据标准曲线换算出样本中AMA-M2浓度。