[发明专利]一种利用东方链霉菌发酵生产万古霉素的种子培养基和培养方法

说明书

本发明涉及一种利用东方链霉菌发酵生产万古霉素的种子培养基和培养方法，该种子培养基中添加了复合变性淀粉、丝素粉和干酪素等物质，有利于提高种子培养质量和万古霉素发酵单位，降低发酵成本，并且最大限度的降低原辅料来源不受环境影响，保证其供应充足，实现万古霉素高效的生产。

技术领域

本发明属于发酵技术领域，特别是涉及一种东方链霉菌的种子培养基和培养方法。

背景技术

万古霉素是从东方链霉菌的发酵液中分离得到的具有抗革兰氏阳性菌的一种糖肽类抗生素。后来由美国Lilly公司开发，于1958年获美国食品药品监督管理局(FDA)批准上市。目前临床上用于治疗由MRSA引起的严重感染疾病的首选药物，并因此被国际抗生素专家誉为“人类对付顽固性耐药菌株的最后一道防线”和“王牌抗生素”。

目前，国内万古霉素的发酵生产采用三级发酵模式，存在的主要问题有以下几点：

1 种子培养基和发酵培养基中加入了葡萄糖，存在葡萄糖效应。

2 发酵单位低，一般在7000u/ml。二级种子培养结束，其菌体浓度偏低，不超过25%，影响了万古霉素发酵技术水平（发酵罐100m³以上规模），导致发酵单位低，一般在7000u/ml。

3发酵周期长，一般超过了160h。特别是一级种子和二级种子培养周期较长，超过了24h，导致能耗较高，影响了生产成本。

4 国内外相关文献缺少针对万古霉素发酵生产工艺中的补料内容。

5 万古霉素生产成本较高，降低了产品市场竞争力。

发明内容

本发明的目的就在于克服上述现有技术的缺陷，提供一种克服葡萄糖效应，增强种子液的质量和稳定性，有效提高发酵单位，缩短发酵周期，降低生产成本的利用东方链霉菌发酵生产万古霉素的种子培养基。

本发明的另一目的是提供一种利用上述种子培养基生产万古霉素的培养方法。

为实现上述目的所采取的技术方案为：

一种利用东方链霉菌发酵生产万古霉素的种子培养基，其特征在于包括一级种子培养基和二级种子培养基，其中

所述一级种子培养基的组成为：

复合变性淀粉8～12g/L、麦芽糊精13～17g/L、鱼粉7～11g/L、丝素粉4～8g/L、玉米浆10～14ml/L、生物氮素2～6g/L、硫酸铵0.5～0.9g/L、轻质碳酸钙1～5g/L、糖化酶0.01～0.05g/L；

所述二级种子培养基的组成为：

复合变性淀粉10～14g/L、麦芽糊精15～19g/L、鱼粉9～13g/L、丝素粉6～10g/L、干酪素3～7g/L、玉米浆14～18ml/L、生物氮素4～8g/L、硫酸铵0.6～1g/L、轻质碳酸钙1～5g/L、糖化酶0.03～0.07g/L、聚醚改性硅0.05～0.09g/L。

所述复合变性淀粉为氧化交联淀粉或交联酯化淀粉。

一种利用上述种子培养基发酵生产万古霉素的培养方法，其特征在于其工艺步骤包括：

1） 一级种子培养：首先将一级种子培养基灭菌并冷却至25～30℃，并用无菌空气保压，然后在火焰保护下，将已经培养好的东方链霉菌母瓶发酵液按照0.1～0.2L/m³的接种量接入一级种子培养基中进行一级种子培养，至菌体浓度25～30%、pH值6.5～7.5、培养时间10～15h移种；