[发明专利]一种利用毕赤酵母高效分泌表达转肽酶Sortase A的方法

权利要求书

1.一种分泌表达转肽酶SortaseA的基因工程菌，其特征在于，选择AOX1或GAP启动子，以毕赤酵母SMD1168为表达宿主，以pPIC9k为表达载体，构建得到分泌表达SortaseA的基因工程菌。

2.根据权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，以AOX1为启动子。

3.一种应用权利要求1所述的基因工程菌生产转肽酶SortaseA的方法，其特征在于，是诱导培养重组毕赤酵母使其表达转肽酶SortaseA。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，重组毕赤酵母在BMGY培养基中活化；所述BMGY培养基含13.4g/L不含氨基酸的YNB，20g/L蛋白胨，10g/L酵母膏，10g/L甘油，100mM磷酸盐。

5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，将活化后的重组毕赤酵母转接至初始pH6.0的BSM无机培养基中，28℃诱导产酶，每隔24h加入1.5％含微量元素的纯甲醇进行诱导表达，诱导培养72h。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述BSM无机培养基含26.7ml/L磷酸，0.93g/L硫酸钙，18.2g/L硫酸钾，14.9g/L硫酸镁，4.13g/L氢氧化钾，40g/L甘油；所述含微量元素的纯甲醇是含CuSO₄·5H₂O 6.0g/L，KI 0.088g/L，MnSO₄·H₂O 3.0g/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.2g/L，H₃BO₃ 0.02g/L，CoCl₂·6H₂O 0.5g/L，ZnCl₂ 20.0g/L，FeSO₄·7H₂O 65.0g/L，Biotin 0.2g/L，浓H₂SO₄ 5.0mL/L的纯甲醇。

7.权利要求1所述的基因工程菌的应用，其特征在于，所述应用包括在生物化学、蛋白质组学、生物医药或生物工程技术领域中的应用，以及在制备蛋白质或多肽的连接工具中的应用。