[发明专利]一种AaPDR2基因启动子及其功能验证方法和应用

权利要求书

1.一种AaPDR2基因启动子，其特征在于，所述AaPDR2基因启动子的DNA序列包括以下顺式作用元件：ABRE、Box I、CAAT-box、CCAAT-box、CGTCA-motif、G-Box、G-box、GA-motif和TATA-box，所述AaPDR2基因启动子的DNA序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种如权利要求1所述的AaPDR2基因启动子的功能验证方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、培养青蒿无菌苗；

步骤二、提取所述步骤一中培养的青蒿无菌苗基因组，以此克隆所述AaPDR2基因启动子；

步骤三、分析调控基因在所述AaPDR2基因启动子上面的顺式作用元件，确定所述AaPDR2基因启动子的类型；

步骤四、将克隆到的所述AaPDR2基因启动子通过酶切连接连入pCAMBIA1391z载体中，得到1391Z-proAaPDR2载体；

步骤五、将所述1391Z-proAaPDR2载体转化根癌农杆菌，得到1391Z-proAaPDR2载体的根癌农杆菌工程菌；

步骤六、将所述1391Z-proAaPDR2载体的根癌农杆菌工程菌转化青蒿，得到转基因青蒿植株；

步骤七、PCR检测所述转基因青蒿植株；

步骤八、确定所述AaPDR2基因启动子所引导的GUS报告基因在植株中的表达部位；

其中，所述pCAMBIA1391z载体上带有GUS报告基因。

3.如权利要求2所述的AaPDR2基因启动子的功能验证方法，其特征在于，所述步骤二中克隆所述AaPDR2基因启动子的具体方法是：以所述青蒿无菌苗基因组为模板，采用两轮巢式PCR方法扩增AaPDR2基因启动子；其中第一轮所用到的引物对为：AaPDR2-PF1：ATGGTATTAGTCTTCGTGGTCAAC和AaPDR2-PR1：TTGGTGTGTTTGTTTTTGCCTATTTATG；第二轮所用到的引物对为：AaPDR2-PF2：ACCCTTCATTATCCTCATCAGCAG和AaPDR2-PR2：CTTTATTCCAGTCAGTTCCATCCATTG。

4.如权利要求2所述的AaPDR2基因启动子的功能验证方法，其特征在于，所述步骤四中采用PstI酶切位点和BamHI酶切位点双酶切连接连入pCAMBIA1391z载体，其中在正向引物中引入PstI酶切位点，反向引物中引入BamHI酶切位点；所述正向引物为：Pro-PDR2-PstI-FP：TGCACTGCAGTTGGTGTGTTTGTTTTTGCCTAT；所述反向引物为：Pro-PDR2-BamHI-RP：CGGGATCCTGTTACAAAAGATCAATTGATC。

5.一种如权利要求1所述的AaPDR2基因启动子在青蒿基因工程育种中的应用。

6.如权利要求5所述的AaPDR2基因启动子在青蒿基因工程育种中的应用，其特征在于，所述AaPDR2基因启动子能够代替组成型启动子引导外源基因在植物腺毛中表达；所述AaPDR2基因启动子是诱导型启动子。

7.一种如权利要求1所述的AaPDR2基因启动子的应用方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)培养青蒿无菌苗；

(2)提取所述步骤一中培养的青蒿无菌苗基因组，以此克隆所述AaPDR2基因启动子；

(3)将克隆到的所述AaPDR2基因启动子和外源基因融合构建表达载体；

(4)将所述表达载体转化根癌农杆菌，得到带有所述表达载体的根癌农杆菌工程菌；

(5)将所述带有所述表达载体的根癌农杆菌工程菌转化青蒿，得到转基因青蒿植株；

(6)PCR检测所述转基因青蒿植株，所述转基因青蒿植株能够在所述AaPDR2基因启动子的引导下在其植物腺毛中表达所述外源基因。