[发明专利]一种重组纤维结构胶原蛋白海绵的制备方法

权利要求书

1. 一种重组纤维结构胶原蛋白海绵，具有重组纤维结构，整体结构呈海绵状，胶原蛋白海绵表面具有胶原的微纤维结构，其胶原分子以纤维形式存在。

2.如1所述的重组纤维结构胶原蛋白海绵，其特征在于：胶原分子具体有三螺旋结构；能保留其原有的生物学性能，能够吸引原纤维和粘附血小板，随后发生释放反应，触发血小板凝集，并在其纤维间隙内形成血栓；所述胶原蛋白海绵是利用切向流过滤技术进行胶原蛋白的纯化及浓缩后进行分子自组装、凝胶化、冷冻干燥而制备而成；所述胶原蛋白海绵在动物体内2周已逐步降解，4-8周能完全降解，吸水率为自重的60倍以上。

3. 制备如权利要求1~2所述的重组纤维结构胶原蛋白海绵的方法，包括以下步骤：

步骤1，利用切向流过滤技术进行胶原蛋白的纯化及浓缩；

步骤2，纯化浓缩的胶原溶液与一定体积的生物缓冲液进行混合，缓冲液中含有5~20ppm交联剂，且混合时缓冲液的温度为30±0.5℃，调节pH为6.5~8.5，在体外进行分子自组装；

步骤3，离心，弃上清液，获得浑浊液；

步骤4，凝胶化；

步骤5，在不同温度下进行反复预冻、解冻及水洗；

步骤6，冷冻干燥。

4. 制备如权利要求3所述的制备重组纤维结构胶原蛋白海绵的方法，其特征在于：所述步骤1是将盐析后胶原纤维用纯化液进行重溶，使用切向流过滤技术对胶原进行纯化、浓缩，此过程在4~13℃温度下进行。

5. 制备如权利要求3所述的制备重组纤维结构胶原蛋白海绵的方法，其特征在于：所述步骤1中，将盐析后胶原纤维用醋酸溶液重溶，所述盐析后胶原纤维重溶后的浓度为0.5~8mg/mL；所述步骤1中，使用切向流过滤技术对胶原进行纯化，纯化液选用0.01M~0.5M醋酸溶液；所述步骤1纯化过程中结合搅拌及纯化液的补给，使得胶原能够顺利的进行纯化。

6. 制备如权利要求3所述的制备重组纤维结构胶原蛋白海绵的方法，其特征在于：所述步骤1中，纯化时选用改性聚醚砜中空纤维过滤管的截留分子量为50~100KD；最终进行胶原浓缩时选用改性聚醚砜中空纤维过滤管的孔径为0.1~1μm；在2~4h内实现胶原溶液的纯化。

7. 制备如权利要求3所述的制备重组纤维结构胶原蛋白海绵的方法，其特征在于：所述步骤2中，所述胶原溶液的浓度为1~5mg/mL，pH为2.0~3.5；所述生物缓冲液pH为7.2~7.5；分子自组装于30±0.5℃孵育30~90min。

8. 制备如权利要求3所述的制备重组纤维结构胶原蛋白海绵的方法，其特征在于：所述步骤2中，所述生物缓冲液包括HEPES、PBS、TES中的一种或几种；所述交联剂包括甲醛、戊二醛、改性戊二醛、碳化二亚胺中的一种或几种。

9. 制备如权利要求3所述的制备重组纤维结构胶原蛋白海绵的方法，其特征在于：所述步骤5中，具体包括以下工艺：

1）-80℃快速冷冻，解冻，水洗；其中解冻是在室温下进行缓慢解冻；

2）在不同温度下反复冷冻，解冻，水洗：将水凝胶在-40℃和-20℃再进行冷冻；解冻是在室温下进行缓慢解冻。

10. 制备如权利要求3所述的制备重组纤维结构胶原蛋白海绵的方法，其特征在于：所述步骤4具体为：将步骤3获得的浑浊液混合均匀后，装入模具中，继续升温至35~37℃，凝胶化30min~90min；所述步骤5中，所述水洗是将水凝胶浸泡在自重2~5倍的4~10℃去离子水中1~3次，清除凝胶内的盐分和对于交联剂。