[发明专利]一种快速鉴别骆驼源性成分的荧光定量PCR引物、探针组合物、试剂盒及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及食品检验和分子生物学检测技术领域，具体涉及一种快速鉴别骆驼源性成分的荧光定量PCR特异性引物、探针及其试剂盒，特别是用于肉制品中骆驼源性的检验及鉴定。

背景技术

我国骆驼多产于内蒙古、新疆、甘肃、青海、宁夏等地、是世界上最大产地之一。骆驼全身都是宝，驼肉、驼奶、驼毛的开发利用价值大，是农牧民发家致富的好项目。驼肉含有蛋白质、脂肪、钙、磷、铁及维生素A、维生素Bl、维生素B2和尼克酸等成分。肉质细嫩，适口性好，并且含有大量的糖原，故肉甜，很像马肉，可与牛肉媲美。驼峰和驼掌具有很高的医药价值，是高档食品。性味甘温无毒，具有润燥、祛风、活血、消肿的功效。适宜顽痹不仁之风疾者食用。

现代科学研究表明：驼奶属于蛋白类型乳，蛋白质含量远高于马奶和牛奶，而脂肪含量比牛奶和马奶低，是典型的高蛋白低脂肪奶类，驼奶含有丰富的乳糖、维生素C、A、B1、B2、E等成分，易被消化吸收，尤其是生物价值特高的天然胰岛素的含量远远高于牛奶和马奶，并且胆固醇含量低，鲜味氨基酸和各种微量元素含量高。驼奶具有清洁肺和肠道功能，被认为是最具营养和保健作用的产品，将成为继牛奶产业后的第二奶产业。明代李时珍在《本草纲目》中记载：“驼乳味甘、温、无毒，可补中益气，壮筋骨，令人不饥。”实践证明，驼乳能助食开胃，促进新陈代谢，对肺结核、消化道溃疡、高血压、糖尿病等均有一定的辅助治疗作用。

驼毛和驼皮是很重要的商品，驼毛具有细柔轻滑、耐久、保暖性强、绝缘值比纯羊毛高50％等优良特性，被用来编制毛毯、衣物等。驼皮普遍被用来生产高档台灯罩和女士提包等。

虽然从驼肉、驼奶、驼毛、驼皮目前的市场需求情况看，都具有极大的市场空间。但是，因为当前随着优质草场的退化、沙漠化，碱性化等问题，骆驼存栏量逐年下滑，导致骆驼制品却出现了“有价无货”的尴尬局面。致使某些不法商贩用相对廉价的非骆驼类的肉奶毛皮冒充骆驼制品，欺骗消费者，从中谋取暴利。因此，针对骆驼源性制品建立一套科学、准确、快速、低廉的检测方法是十分必要的。GB/T21100-2007《动物源性饲料中骆驼源性成分定性检测方法PCR法》公开了一种饲料中骆驼源成分的检测方法，利用常规PCR扩增待测样品基因后电泳后检测是否为骆驼源成分的方法，此方法步骤复杂、耗时、且检测灵敏度并不高，无法满足当前检测需求。

以聚合酶链式反应(PCR)为基础的技术已逐步成为食品药品中动物源性成分种属鉴定的核心方法。近年来TaqMan探针实时荧光PCR技术的飞速发展大大提高了检测的灵敏度、特异性和准确性，并使得成分含量的定量溯源成为可能。由于荧光定量整个检测过程为闭管操作，所以有效的减少了实验过程中的污染的危险，已经广泛应用于各个领域。目前未有任何公开或报道一种利用TaqMan探针引物混合物、试剂盒和荧光定量PCR检测方法快速鉴别骆驼源性的方法。因此，建立一种快速鉴别骆驼源性的TaqMan探针引物混合物、试剂盒和荧光定量PCR检测方法对相关食品安全的快速监管具有重要的创新性和实践意义。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的是提供一种用于检测肉制品中骆驼源性成分的荧光定量PCR引物、探针；本发明的另一目的是提供一种检测肉制品中骆驼源性成分的荧光定量PCR检测试剂盒，该试剂盒操作方便，不易污染，准确稳定。

为实现上述目的，本发明通过以下技术方案来实现：

快速鉴别骆驼源性成分的荧光定量PCR特异性引物、探针组合物，其特征在于，包括以下引物和探针，其核苷酸序列如下：

(1)引物

上游引物序列：5'ACAAAATCCCATTCCACCCCT3'，如SEQIDNO.1所示；

下游引物序列：5'CGGCTTAATGTGTGGTGGTG3'，如SEQIDNO.2所示；

(2)探针：

5'FAM-CGTACTGTTCTCACCAGACTTATTAGGA3'，如SEQIDNO.3所示。

骆驼Cytb基因参考序列：164bp

ACAAAATCCCATTCCACCCCTACTACACAATTAAAGACATCCTAGGAGCACTGCTACTAATATTAATTCTCCTTATTCTCGTACTGTTCTCACCAGACTTATTAGGAGATCCTGACAACTATACTCCCGCTAACCCCCTCAATACACCACCACACATTAAGCCG，如SEQIDNO.4所示。