[发明专利]凡纳滨对虾DNA病毒新型快速检测试剂盒及方法

说明书

技术领域：

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种凡纳滨对虾DNA病毒新型快速检测试剂盒及 方法。

背景技术：

凡纳滨对虾(Litopenaeusvannamei,又称南美白对虾)在我国对虾养殖中占据绝对优势 地位，已成为我国水产养殖的支柱产业，在中国渔业经济中占有较大的比重。然而，对虾白 斑综合症、早期死亡综合症等病害问题每年给对虾产业造成巨大的损失，严重制约着该产业 的健康发展。DNA类病毒，如：对虾白斑综合症病毒(WhiteSpotSyndromeVirus,WSSV) 及黄头病病毒(YellowHeadVirus,YHV)等是造成凡纳滨对虾上述病害的重要病原。

加强病原检测、提前阻断病毒传播是防控病毒疫病最有效的途径之一。现有的技术方法， 如细胞培养、荧光抗体、免疫组织化学、PCR等都存在一定的不足。细胞培养法检测灵敏度 不高，检测时间长；PCR检测法需要特定的仪器设备，且对检测环境要求较高；荧光技术等 则需要经过复杂的操作，对技术人员的专业要求较高。以上种种不利因素都限制了凡纳滨对 虾相关病害现场快速检测及检测方法在基层普及，使得对虾DNA类病毒的防控基本缺失。

环介导等温扩增技术(Loop-mediatedisothermalAmplification,LAMP)是一种较新型的 PCR技术，通过设计4条特异、高效的引物，能够在等温条件下不间断地快速扩增目的序列， 具有快速、灵敏、特异性高的优点。但现有的LAMP检测试剂盒对实验仪器设备和技术人员 的要求较高，其包含的组份较多，核酸提取过程繁琐，再加上LAMP检测液需要添加各种引 物、酶、反应缓冲液等，容易造成试剂盒污染出现假阳性结果，非常不利于LAMP反应的推 广应用。由于上述限制因素，现行的LAMP检测试剂盒推广应用受到严重制约。

因此，开发出一种操作步骤少、简单有效、不易被污染的凡纳滨对虾DNA病毒检测试 剂盒具有重要的应用价值。

发明内容：

本发明的目的是提供一种操作步骤少、简单有效和不易被污染的凡纳滨对虾DNA病毒 新型快速检测试剂盒及方法。

本发明的凡纳滨对虾DNA病毒新型快速检测试剂盒，其特征在于：所述的凡纳滨对虾 DNA病毒新型快速检测试剂盒包括DNA快速提取液和检测液。

优选，所述的检测液含有核酸荧光染料、环介导等温扩增试剂和检测引物组，所述的检 测引物组为白斑综合症病毒(WhiteSpotSyndromeVirus)的检测引物组或黄头病病毒(Yellow HeadVirus)的检测引物组。

所述的检测液中的白斑综合症病毒的检测引物组，其由下列引物组成：

上游外引物F3：5’-ATCAAAGGCCTTTGTCGGT-3’；(如SEQIDNO.1所示)；

下游外引物B3：5’-GGTCTCAGTGCCAGAGTAGG-3’；(如SEQIDNO.2所示)；

上游内引物FIP：5’-ACCACACACAAAGGTGCCAACTAGCTCCAACACCTCCTCC-3’； (如SEQIDNO.3所示)；

下游内引物BIP：5’-ATTGGTGCGCCAAAGGTGGTCGTGCACGTACATGTCGA-3’；(如 SEQIDNO.4所示)；

所述的检测液中的黄头病病毒的检测引物组，其由下列引物组成：

上游外引物F3：5’-GGAACACCAGTGACTCCATC-3’；(如SEQIDNO.5所示)

下游外引物B3：5’-CACTGTTTACGCGGGCTC-3’；(如SEQIDNO.6所示)

上游内引物FIP：5’-ACCATGTCTGGGATGCGCTGTCGACATCGGTATCGCAAGT-3’； (如SEQIDNO.7所示)

下游内引物BIP：5’-GGAGGTGGGACGTTGTAAGCATAGATGCAGTAGACTCGGCC-3’。 (如SEQIDNO.8所示)。