[发明专利]凡纳滨对虾DNA病毒新型快速检测试剂盒及方法

权利要求书

1.一种凡纳滨对虾DNA病毒新型快速检测试剂盒，其特征在于：所述的凡纳滨对虾DNA 病毒新型快速检测试剂盒包括DNA快速提取液和检测液。

2.根据权利要求1所述的凡纳滨对虾DNA病毒新型快速检测试剂盒，其特征在于，所述的 检测液含有核酸荧光染料、环介导等温扩增试剂和检测引物组，所述的检测引物组为白斑 综合症病毒(WhiteSpotSyndromeVirus)的检测引物组或黄头病病毒(YellowHeadVirus) 的检测引物组。

3.根据权利要求2所述的凡纳滨对虾DNA病毒新型快速检测试剂盒，其特征在于，所述的 检测液中的白斑综合症病毒的检测引物组，其由下列引物组成：

上游外引物F3：5’-ATCAAAGGCCTTTGTCGGT-3’；

下游外引物B3：5’-GGTCTCAGTGCCAGAGTAGG-3’；

上游内引物FIP：5’-ACCACACACAAAGGTGCCAACTAGCTCCAACACCTCCTCC-3’；

下游内引物BIP：5’-ATTGGTGCGCCAAAGGTGGTCGTGCACGTACATGTCGA-3’；

所述的检测液中的黄头病病毒的检测引物组，其由下列引物组成：

上游外引物F3：5’-GGAACACCAGTGACTCCATC-3’；

下游外引物B3：5’-CACTGTTTACGCGGGCTC-3’；

上游内引物FIP：5’-ACCATGTCTGGGATGCGCTGTCGACATCGGTATCGCAAGT-3’；

下游内引物BIP：5’-GGAGGTGGGACGTTGTAAGCATAGATGCAGTAGACTCGGCC-3’。

4.根据权利要求1或2所述的凡纳滨对虾DNA病毒新型快速检测试剂盒，其特征在于：所 述的DNA快速提取液是EpicentreBiotechnologies公司的QuickExtract^TMDNAExtraction Solution型号的试剂；所述的检测液为环介导等温扩增反应液，其20μL体系中含有：8-10 U/μLBst2.0聚合酶1μL，1.0-2.0mMdNTPs3.5μL，10×AmplificationBuffer2.5μL，6-8mM MgSO₄1.5μL，1M甜菜碱5μL，10×SYTO-9染料0.5μL，0.2μM上游外引物F31μL， 0.2μM下游外引物B31μL，1.6μM上游内引物FIP1μL，1.6μM下游内引物BIP1μL， ddH₂O2μL；其中，10×AmplificationBuffer含有200mMTris-HCl、100mM(NH₄)₂SO₄、 500mMKCl、20mMMgSO₄和1％Tween20，pH8.8。

5.根据权利要求4所述的凡纳滨对虾DNA病毒新型快速检测试剂盒，其特征在于，所述的 检测液所包含的组份已提前混合；所述的DNA快速提取液是直接分装而成的；所述的DNA 快速提取液及检测液都为可直接使用的工作液。

6.一种非疾病的诊断和治疗目的的凡纳滨对虾DNA病毒的快速检测方法，其特征在于：其 是应用权利要求2所述的凡纳滨对虾DNA病毒新型快速检测试剂盒进行检测，具体包括 以下步骤：将样品加入DNA快速提取液中进行DNA提取制成DNA溶液，然后将DNA 溶液加入到含有白斑综合症病毒的检测引物组或黄头病病毒的检测引物组的检测液中，再 置于63-68℃的水浴下保温1-1.5h，若检测液颜色发生改变，则说明样品中含有相应的白 斑综合症病毒或黄头病病毒，如果检测液颜色未发生改变，则说明样品中不含有白斑综合 症病毒或黄头病病毒。

7.根据权利要求6所述的快速检测方法，其特征在于：所述的将样品加入DNA快速提取液 中进行DNA提取制成DNA溶液是将0.1-0.5g的待检测样品加入DNA快速提取液中剪碎， 取上清置于另一干净离心管中，剧烈震荡15-20s，65℃保温6-15min，再剧烈震荡15-20s， 最后置于98℃条件下孵育2min终止反应，制成DNA溶液；所述的将DNA溶液加入到 含有白斑综合症病毒的检测引物组或黄头病病毒的检测引物组的检测液中是吸取2-6微升 DNA溶液加入20μL的含有白斑综合症病毒的检测引物组或黄头病病毒的检测引物组的 检测液中。