[发明专利]一种猪博卡病毒环介导等温扩增试剂盒及其应用在审
| 申请号： | 201610260692.2 | 申请日： | 2016-04-25 |
| 公开（公告）号： | CN105713995A | 公开（公告）日： | 2016-06-29 |
| 发明（设计）人： | 卢冰霞;何颖;秦毅斌;赵武;陈忠伟;段群棚;李斌;周英宁;梁家幸;杨思仪;蒋冬福;苏乾莲 | 申请（专利权）人： | 广西壮族自治区兽医研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93 |
| 代理公司： | 广州市红荔专利代理有限公司 44214 | 代理人： | 李彦孚;何承鑫 |
| 地址： | 530000 广西壮族*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 种猪 病毒 环介导 等温 扩增 试剂盒 及其 应用 | ||
1.一种猪博卡病毒环介导等温扩增试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括LAMP引物，其引 物包括外引物F3（SEQIDNO：1）与B3（SEQIDNO：2）、内引物FIP（SEQIDNO：3）与BIP（SEQ IDNO：4）和环引物LF（SEQIDNO：5）与LB（SEQIDNO：6）；
其中引物的序列分别为：
F3CCTGACAGAAAGAAGCTGAA
B3ACTCCAACTCCGATGTCG
FIPTCTGATTCATCCTGTGGCTGTGAGGTACTTACTAAAGAACAGGAAG
BIPGATCGAGCTATACAACCGAAGAAGGCTCTGTTTCGGAGATGT
LFATGCCCACTCATCTAGGAACT
LBAGAGCAGCTCTTCGAATCGC。
2.根据权利要求1所述的猪博卡病毒环介导等温扩增试剂盒，其特征在于，所述的试剂 盒还包括2×反应缓冲液、BstDNA聚合酶、荧光目视检测试剂、超纯水和猪博卡病毒DNA模 板；所述的2×反应缓冲液包括Tris-HCL、KCL、MgSO4、(NH4)2SO4、Tween20、Betaine和dNTPs。
3.根据权利要求2所述的猪博卡病毒环介导等温扩增试剂盒，其特征在于，所述的荧光 目视检测试剂采用钙黄绿素荧光试剂，荧光试剂在反应前加入。
4.根据权利要求2所述的猪博卡病毒环介导等温扩增试剂盒，其特征在于，所述的2× 反应缓冲液包括Tris-HCL35-55mM、KCL10-30mM、MgSO415-28mM、(NH4)2SO418-28mM、 Tween200.5-1.5℅、Betaine1.3-3.5M和dNTPs2.4-4.8mM。
5.根据权利要求2所述的猪博卡病毒环介导等温扩增试剂盒的应用，其特征在于，具体 操作步骤包括：
（1）LAMP引物的设计与合成
（2）猪博卡病毒DNA模板的提取
（3）LAMP反应体系建立
（4）LAMP检测方法。
6.根据权利要求5所述的猪博卡病毒环介导等温扩增试剂盒的应用，其特征在于，所述 的LAMP反应体系建立以25μL计，
2×反应缓冲液12.5μL
BstDNA聚合酶1μL
FIP40pmol
BIP40pmol
F35pmol
B35pmol
LF20pmol
LP20pmol
猪博卡病毒DNA2μL
超纯水补足25μL。
7.根据权利要求5所述的猪博卡病毒环介导等温扩增试剂盒的应用，其特征在于，所述 的LAMP检测方法是采用特异性检测、敏感性检测和荧光可视化检测的方法。
8.根据权利要求5所述的猪博卡病毒环介导等温扩增试剂盒的应用，其特征在于，所述 的LAMP检测方法采用实时浊度仪进行密闭全程监控。
9.根据权利要求5所述的猪博卡病毒环介导等温扩增试剂盒的应用，其特征在于，所述 的LAMP检测方法反应温度为63℃，反应在15-20分钟出现扩增。
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