[发明专利]甲硫氨酸-叶酸代谢关键酶MTHFR的SNP检测试剂盒及其使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及医疗检测领域，更具体的说是涉及一种甲硫氨酸-叶酸代谢关键 酶MTHFR的SNP检测试剂盒及其使用方法。

背景技术

MTHFR全称：亚甲基四氢叶酸还原酶，它是甲硫氨酸-叶酸代谢中的关键 酶，它可以使5，10-亚甲基四氢叶酸还原为5-甲基四氢叶酸，从而作为甲基的间 接供体参与体内嘌呤、嘧啶的合成及DNA、RNA、蛋白质的甲基化，同时维持 体内正常的同型半胱氨酸水平。

大量研究均证实母亲MTHFRC677T和MTHFRA1298C突变是生育神经 管缺陷患儿的遗传风险因素。MTHFRC677T和MTHFRA1298C导致MTHFR 的酶活力降低，引起血浆高同型半胱氨酸血症。妊娠期高同型半胱氨酸血症可 导致血液呈高凝状态，增加胎盘血栓形成的危险，引起胎盘栓塞，造成母胎循 环不足，从而可导致流产、胎儿生长受限和胎盘早剥；另一方面，高同型半胱 氨酸血症可在金属离子介导下生成过氧化物及氧自由基，损伤血管内皮细胞的 结构和功能并进一步导致患者血管舒缩平衡紊乱，从而引发妊高征。另外由于 胎盘组织中MTHFR活力缺乏，致使作为甲基间接供体的5-甲基四氢叶酸生成障 碍，进一步影响嘌呤、嘧啶和核酸的代谢及DNA甲基化，使得胎儿发育必需的 生物成分如DNA与蛋白质的甲基化不足，也是引起流产或使胎儿生长受限的原 因之一。这类人需要补充更多的叶酸才能达到预防疾病发生的效果。

目前针对基因多态性的检测方法最常见方法为测序法，该方法适合高通量 多位点的检测，但操作耗时长且灵敏度低，不适合快速临床检测；高分辨率溶 解曲线法对设备要求比较特殊，需要具有安装高分辨率软件、温度比较敏感的 机器才能使用，它的临床推广存在一定的困难。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种能够实现快速检测 甲硫氨酸-叶酸代谢关键酶MTHFR的SNP检测试剂盒及其使用方法。

为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：

一种甲硫氨酸-叶酸代谢关键酶MTHFR的SNP检测试剂盒，包括下列体积份的 组成构成：

所述引物为MTHFRC677T引物和MTHFRA1298C引物，

所述MTHFRC677T引物包括：

正向引物：MTHFRC677T-F：5’-GCACTTGAAGGAGAAGGTGTCT-3’；

反向引物：MTHFRC677T-R：5’-TGTGTCAGCCTCAAAGAAAAGCT-3’；

所述MTHFRA1298C引物包括：

正向引物：MTHFRA1298C-F：5’-GGAGGAGCTGCTGAAGATGTG-3’；

反向引物：MTHFRA1298C-R：5’-CCCGAGAGGTAAAGAACAAAGACTT-3’；

所述探针为MTHFRC677T探针和MTHFRA1298C探针

MTHFRC677T探针包括：

MTHFRC677T野生型探针：5’-荧光基团-ATGAAATCGGCTCCCGC-MGB-3’；

MTHFRC677T突变型探针：5’-荧光基团-ATGAAATCGACTCCCGC-MGB-3’；

所述MTHFRA1298C探针包括：

MTHFRA1298C野生型探针：5’-荧光基团-CAAAGACACTTTCTTC-MGB-3’；

MTHFRA1298C突变型探针：5’-荧光基团-AGACACTTGCTTCACT-MGB-3’。

作为本发明的进一步改进，所述预混物为2×PCR酶反应预混液，所述2×PCR 酶反应预混液含有0.1units/μl的TaqDNAPolymerase(recombinant)、4mmol/L的 MgCl₂、0.5mmol/L的dNTPs。

作为本发明的进一步改进，所述溶剂为双蒸水。

作为本发明的进一步改进，所述引物和探针体积比为1∶1。

作为本发明的进一步改进，所述正向引物和反向引物用量相同。

作为本发明的进一步改进，所述MTHFRC677T野生型探针和MTHFRC677T 突变型探针用量相同。