[发明专利]甲硫氨酸-叶酸代谢关键酶MTHFR的SNP检测试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种甲硫氨酸-叶酸代谢关键酶MTHFR的SNP检测试剂盒，其特征在于： 包括下列体积份的组成构成：

所述引物为MTHFRC677T引物和MTHFRA1298C引物，

所述MTHFRC677T引物包括：

正向引物：MTHFRC677T-F：5’-GCACTTGAAGGAGAAGGTGTCT-3’；

反向引物：MTHFRC677T-R：5’-TGTGTCAGCCTCAAAGAAAAGCT-3’；

所述MTHFRA1298C引物包括：

正向引物：MTHFRA1298C-F：5’-GGAGGAGCTGCTGAAGATGTG-3’；

反向引物：MTHFRA1298C-R：5’-CCCGAGAGGTAAAGAACAAAGACTT-3’；

所述探针为MTHFRC677T探针和MTHFRA1298C探针

MTHFRC677T探针包括：

MTHFRC677T野生型探针：5’-荧光基团-ATGAAATCGGCTCCCGC-MGB-3’；

MTHFRC677T突变型探针：5’-荧光基团-ATGAAATCGACTCCCGC-MGB-3’；

所述MTHFRA1298C探针包括：

MTHFRA1298C野生型探针：5’-荧光基团-CAAAGACACTTTCTTC-MGB-3’；

MTHFRA1298C突变型探针：5’-荧光基团-AGACACTTGCTTCACT-MGB-3’。

2.根据权利要求1所述的甲硫氨酸-叶酸代谢关键酶MTHFR的SNP检测试 剂盒，其特征在于：所述预混物为2×PCR酶反应预混液，所述2×PCR酶反应 预混液含有0.1units/μl的TaqDNAPolymerase(recombinant)、4mmol/L的MgCl₂、 0.5mmol/L的dNTPs。

3.根据权利要求1和2所述的甲硫氨酸-叶酸代谢关键酶MTHFR的SNP检测 试剂盒，其特征在于：所述溶剂为双蒸水。

4.根据权利要求3所述的甲硫氨酸-叶酸代谢关键酶MTHFR的SNP检测试剂 盒，其特征在于：所述引物和探针体积比为1∶1。

5.根据权利要求1所述的甲硫氨酸-叶酸代谢关键酶MTHFR的SNP检测试剂 盒，其特征在于：所述正向引物和反向引物用量相同。

6.根据权利要求1所述的甲硫氨酸-叶酸代谢关键酶MTHFR的SNP检测试剂 盒，其特征在于：所述野生型探针和突变型探针用量相同。

7.如权利要求1至6所述的试剂盒的使用方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)提取待测人的基因组DNA；

2)每个PCR体系为包含体积份的：预混液10～25份，DNA模板1份，引物 1～2份、探针1～2份；

3)将配置好的PCR体系放入荧光定量PCR仪中，进行Real-timePCR检测；反 应条件为：

95℃10分钟预变性；循环阶段，95℃15秒并在此采集荧光信号，60℃1分钟， 40-60个循环；

4)通过荧光定量PCR仪所收集数据确定检测位点的基因型。

8.如权利要求7所述的试剂盒的使用方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)提取待测人的基因组DNA；

2)每个PCR体系，包含2×PCR酶反应预混液15μL，DNA模板1μL，正 向反向引物各1μL，野生型和突变型荧光探针各1μL，双蒸水10μL；

其中2×PCR酶反应预混液成分及含量：TaqDNAPolymerase(recombinant)： 0.1units/μl；MgCl₂：4mmol/L；dNTPs(dATP，dCTP，dGTP，dTTP)：0.5mmol/L；

其中基因组DNA模板中DNA含量10-100ng，正向反向引物浓度100-1000nM， 野生型和突变型荧光探针浓度100-1000nM；

3)将配置好的PCR体系放入荧光定量PCR仪中，进行Real-timePCR检测；反 应条件为：

95℃10分钟预变性；循环阶段，95℃15秒并在此采集荧光信号，60℃1分钟， 40-60个循环；

4)通过荧光定量PCR仪所收集数据确定检测位点的基因型。