[发明专利]一种快速检测空肠弯曲菌的免疫层析试纸条及其制备方法

说明书

技术领域

本发明设计医学检验测试领域，具体涉及一种快速检测空肠弯曲菌的免疫层析试纸条及其制备方法。

技术背景

空肠弯曲菌(campylobacterjejunienteritis)是1973年Butzler等从腹泻病人粪便中分离出来，目前已认识其为人类腹泻的主要致病菌之一。空肠弯曲茵是一种人畜共患病病原茵，可以引起人和动物发生多种疾病，并且是一种食物源性病原茵，被认为是引起全世界人类细菌性腹泻的主要原因，对空肠弯曲茵的致病机理的研究越来越多。其致病因素包括粘附、侵袭、产生毒素和分子模拟机制等四个方面，通过分子分子模拟机制可以引起最严重的并发症一格林一巴利综合征。空肠弯曲茵可以通过产生细胞紧张性肠毒素、细胞毒素和细胞致死性膨胀毒素而致病空肠弯曲菌肠炎的发病率在发达国家超过细菌性痢疾，在发展中国家发病率几乎等同于细菌性痢疾。本菌作为重要的食源性致病菌，随着食物进入肠道后在含微量氧环境下迅速繁殖，主要侵犯空肠、回肠和结肠，侵袭肠粘膜，造成充血及出血性损伤，近年来观察到有些菌株能产生类似霍乱肠毒素，引起肠腔内液体分泌增加。

目前空肠弯曲菌的检测主要依赖于国标所规定的生化鉴定，其缺点是操作繁琐、检测周期较长，无法适应大量的样品筛查。免疫学检测是近年来出现的最快速、准确、稳定的快速检测手段，但国内外目前尚无可运用于检测实践的快速检测产品。

发明内容

本发明解决的技术问题就是提供一种快速检测空肠弯曲菌的免疫层析试纸条及其制备方法。

本发明的技术方案为：一种快速检测空肠弯曲菌的免疫层析试纸条，包括塑料底板、样品垫、金标结合垫、带有检测线和质控线的硝酸纤维素膜(NC膜)、吸水垫。

进一步的，所述的金标结合垫为含有胶体金标记的空肠弯曲菌的单克隆抗体的玻璃纤维膜。

进一步的，所述的硝酸纤维素膜(NC膜)上包被有空肠弯曲菌特异性抗原的单克隆抗体或空肠弯曲菌特异性抗原的多克隆抗体作为检测线和二抗IgG作为质控线。

进一步的，所述的二抗IgG羊抗鼠的的IgG的多克隆抗体。

一种快速检测空肠弯曲菌的免疫层析试纸条的制备方法，包括以下步骤：

(1)空肠弯曲菌特异性抗原的单克隆抗体或空肠弯曲菌特异性抗原的多克隆抗体的制备：先诱导培养基因工程菌表达空肠弯曲菌PEB1重组蛋白，将PEB1重组蛋白溶液联合等体积的佐剂注入免疫BALB/C小鼠，检测小鼠血清合格后，取小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞在50％PEC4000作用下融合，建立杂交瘤细胞株，然后采用间接ELISA法筛选阳性细胞株，然后阳性细胞株分泌的抗体即为空肠弯曲菌特异性抗原的单克隆抗体或多克隆抗体；

(2)带有检测线和质控线的硝酸纤维素膜的制备：将步骤(1)制备的空肠弯曲菌特异性抗原的单克隆抗体或空肠弯曲菌特异性抗原的多克隆抗体稀释至浓度为1.4～1.6mg/ml，将羊抗鼠的的IgG的多克隆抗体稀释至浓度为1.8～2.2mg/ml，然后用划膜仪以5μL/cm的浓度均匀喷在硝酸纤维膜上，在37℃的恒温烘箱中烘干；

(3)金标结合垫的制备：先按40:1的质量比向氯金酸水溶液中加入柠檬酸三钠Na3C6H5O7·2H2O溶液加热制成胶体金溶液，然后调整胶体金pH值为7.4～8.0，向胶体金溶液中加入空肠弯曲菌特异性抗原的单克隆抗体或空肠弯曲菌特异性抗原的多克隆抗体，胶体金和抗体的质量配比为24:1，然后加入稳定剂(含0.05％BSA，pH8.0，0.01MTris缓冲液)稳定处理后，按每平方厘米65μl的量均匀吸附于玻璃纤维膜上，冷冻干燥，备用；

4)试纸条的制备：将样品垫、金标结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫自上而下依次粘贴在塑料底板上，组装成试纸条，其中硝酸纤维素膜的上方粘帖吸水垫，硝酸纤维素膜与吸水垫相互交叠0.2～0.4mm，在硝酸纤维素膜的下方依次粘贴玻璃纤维膜和样品垫，硝酸纤维膜与玻璃纤维膜相互交叠0.3～0.5mm，玻璃纤维膜与样品垫相互交叠2～4mm，然后将试纸再切割成一定宽度的长条，再将试纸条安装在长条扁平壳状的检测卡外壳中，即得本发明的快速检测空肠弯曲菌的免疫层析试纸条。