[发明专利]一种快速检测空肠弯曲菌的免疫层析试纸条及其制备方法

权利要求书

1.一种快速检测空肠弯曲菌的免疫层析试纸条，其特征在于，其包括塑料底板、样品垫、金标结合垫、带有检测线和质控线的硝酸纤维素膜(NC膜)、吸水垫。

2.如权利要求1所述的一种快速检测空肠弯曲菌的免疫层析试纸条，其特征在于，所述的金标结合垫为含有胶体金标记的空肠弯曲菌的单克隆抗体的玻璃纤维膜。

3.如权利要求1所述的一种快速检测空肠弯曲菌的免疫层析试纸条，其特征在于，所述的硝酸纤维素膜(NC膜)上包被有空肠弯曲菌特异性抗原的单克隆抗体或空肠弯曲菌特异性抗原的多克隆抗体作为检测线和二抗IgG作为质控线。

4.如权利要求3所述的一种快速检测空肠弯曲菌的免疫层析试纸条，其特征在于，所述的二抗IgG羊抗鼠的的IgG的多克隆抗体。

5.如权利要求1～4任意一项所述的一种快速检测空肠弯曲菌的免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)空肠弯曲菌特异性抗原的单克隆抗体或空肠弯曲菌特异性抗原的多克隆抗体的制备：先诱导培养基因工程菌表达空肠弯曲菌PEB1重组蛋白，将PEB1重组蛋白溶液联合等体积的佐剂注入免疫BALB/C小鼠，检测小鼠血清合格后，取小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞在50％PEC4000作用下融合，建立杂交瘤细胞株，然后采用间接ELISA法筛选阳性细胞株，然后阳性细胞株分泌的抗体即为空肠弯曲菌特异性抗原的单克隆抗体或多克隆抗体；

(2)带有检测线和质控线的硝酸纤维素膜的制备：将步骤(1)制备的空肠弯曲菌特异性抗原的单克隆抗体或空肠弯曲菌特异性抗原的多克隆抗体稀释至浓度为1.4～1.6mg/ml，将羊抗鼠的的IgG的多克隆抗体稀释至浓度为1.8～2.2mg/ml，然后用划膜仪以5μL/cm的浓度均匀喷在硝酸纤维膜上，在37℃的恒温烘箱中烘干；

(3)金标结合垫的制备：先按40:1的质量比向氯金酸水溶液中加入柠檬酸三钠Na₃C₆H₅O₇·2H₂O溶液加热制成胶体金溶液，然后调整胶体金pH值为7.4～8.0，向胶体金溶液中加入空肠弯曲菌特异性抗原的单克隆抗体或空肠弯曲菌特异性抗原的多克隆抗体，胶体金和抗体的质量配比为24:1，然后加入稳定剂(含0.05％BSA，pH8.0，0.01MTris缓冲液)稳定处理后，按每平方厘米65μl的量均匀吸附于玻璃纤维膜上，冷冻干燥，备用；

4)试纸条的制备：将样品垫、金标结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫自上而下依次粘贴在塑料底板上，组装成试纸条，其中硝酸纤维素膜的上方粘帖吸水垫，硝酸纤维素膜与吸水垫相互交叠0.2～0.4mm，在硝酸纤维素膜的下方依次粘贴玻璃纤维膜和样品垫，硝酸纤维膜与玻璃纤维膜相互交叠0.3～0.5mm，玻璃纤维膜与样品垫相互交叠2～4mm，然后将试纸再切割成一定宽度的长条，再将试纸条安装在长条扁平壳状的检测卡外壳中，即得本发明的快速检测空肠弯曲菌的免疫层析试纸条。