[发明专利]一种双靶标融合蛋白及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药和技术领域，特别是涉及一种双靶标融合蛋白及其制备方法和用途，所述双靶标融合蛋白能同时结合PDGFβ和VEGF细胞因子，并可用于治疗与PDGFβ和VEGF介入的相关疾病。

背景技术

新生血管的形成需要多种细胞生长因子参与，其中血管内皮生长因子(VEGF)尤为重要。

VEGF和细胞膜上的氨酸激酶受体结合，激活下行信号传递通路，与其他多个血管内皮生长因子协同参与一系列生理或病理作用。其中，VEGF对血管内皮细胞的生长、迁移、存活以及血管渗透性起着至关重要作用。

VEGF及其受体(VEGFR)不仅在生长发育，生殖，组织创伤和骨折修复等过程中起重要作用，而且在病理过程中，如在肿瘤，特别是实体肿瘤的发生、发展和肿瘤的转移扩散过程，在湿性AMD等血管增生性疾病中发挥关键作用。在人体血管异常增生性疾病中多伴有VEGF的过度表达。

通过阻断VEGF/VEGFR的信号通路来抑制异常新生血管增生从而达到治疗癌症和AMD目的，在临床上已取得了令人振奋的效果。然而，仍有相当部分临床病例对目前治疗血管异常增生性疾病的治疗方案无明显疗效，或仅呈现短期效果或出现反弹现象。其中重要原因之一是血管周边细胞(Pericyte)与血管内皮细胞的相互作用。PDGFβ通过与其受体PDGFRβ的作用，不仅能够募集血管周边细胞到新生血管壁周，对新生血管起着稳定支持作用；还能够诱导分化的胚胎干细胞毛细血管生成，加速内皮细胞的分化。增加PDGFRβ活性又伴随VEGF-A和VEGFR-2过度表达，促进新生血管形成。在单纯干预VEGF/VEGFR信号的情况下，周边细胞仍然能够向血管内皮细胞提供支持和生存信号，使得单靶向作用VEGF或VEGFR的抗血管增生药物在临床上治疗效果不尽人意。血管增生是一个复杂、有多重因素参与的过程。仅针对血管增生中一个因素或环节的治疗策略往往不能够取得满意的临床治疗效果。若同时阻断VEGF/VEGFR和PDGFβ/PDGFRβ的信号通路，无疑具有改变现有临床生物药物单靶向治疗异常血管增生疾病的不足，提高治疗效果。联合用药已在临床上广泛用于肿瘤等多因素介入多机理参与的复杂疑难性疾病。而联合用药，特别是联合应用特异性的生物靶向药物，将会增加医疗成本。

目前主要用于抗血管增生性疾病的特异性的生物靶向药物尚是单靶向药物，其中包括与VEGF-A特异性结合的贝法单抗、与VEGFR2结合的雷莫芦单抗，与VEGF结合的Zaltrap和康柏西普融合蛋白。同时双靶向阻断VEGF/PDGFβ或受体的特异性生物靶向药物在临床上尚未见报道。本发明研发成功，无疑将改变现有治疗血管异常增生性疾病的不足。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种双靶标融合蛋白及其制备方法和用途，用于解决现有技术的不足。所述双靶标融合蛋白是能同时结合PDGFβ和VEGF细胞因子的融合蛋白，并可用于治疗与PDGFβ和VEGF引起的相关疾病，如肿瘤，AMD。

由于在人体多种癌症和AMD疾病中均有异常新生血管生长和VEGF水平异常升高，伴有PDGFβ/PDGFRβ通路活性增强，因此在治疗这类异常新生血管增生疾病时，同时阻断PDGFβ和VEGF的生物作用会比单独阻断VEGF的生物作用更加有效。所以本发明的目的在于构建和制备具有生物活性的嵌合分子，所述嵌合分子能够结合并阻断与血管生长密切相关的细胞生长因子PDGFβ和VEGF。为实现上述目的及其他相关目的，本发明第一方面提供一种双靶标融合蛋白，所述双靶标融合蛋白包括三个结构功能区域，所述三个结构功能区域分别是PDGFRβ胞外免疫样球蛋白区域D1-D3(PDGFRβD1-D3)、VEGFR1II-VEGFR2III和人免疫球蛋白恒定区Fc片段。

所述PDGFRβD1-D3的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

所述VEGFR1II-VEGFR2III的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

所述人免疫球蛋白恒定区Fc可以是人IgG1的，也可以是亚型IgG2，IgG3，IgG4或人IgM和IgA的。Fc片段可以是恒定区全长也可以是部分。

优选的，所述人免疫球蛋白的Fc片段为人免疫球蛋白IgG的恒定区(Fc)包括胶链区、CH2和CH3区。

优选的，所述人免疫球蛋白的Fc片段的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示。