[发明专利]一种高活性蛋清抗氧化肽的制备工艺

说明书

技术领域

本发明涉及蛋清蛋白技术领域，具体涉及一种高活性蛋清抗氧化 肽的制备工艺。

背景技术

我国拥有世界上最为丰富的禽蛋资源，禽蛋产量1985年以来一 直居世界第一位。蛋清粉是一种资源丰富、价格低廉的优质蛋白资 源，主要包含卵清蛋白、卵转铁蛋白、溶菌酶、卵粘蛋白、类卵粘蛋 白、卵球蛋白和抗生物素蛋白，这些蛋白质含有人体所必需的多种氨 基酸，且氨基酸组成配比均衡性好，机体利用率高。但是，蛋清粉腥 味重、溶解性差、粘度大、受热易凝固，这些性质限制了它在食品加 工中的应用。因此，非常有必要对蛋清粉进行深加工，以提高蛋清粉 的应用价值。

随着禽蛋产量大幅度增长，蛋品加工深度与技术含量不断提高。 到目前为止，主要有三种蛋清深加工方法，即传统理化加工法、微生 物发酵法以及蛋白酶体外酶解法。蛋清经蛋白酶适宜酶解后，除可在 一定程度上改善其功能特性和降低过敏原性蛋白的抗原性外，还可产 生一些具有特殊生物学活性的小肽。国内外学者关于蛋清蛋白酶解产 物抗肿瘤、抗高血压、免疫调节等研究取得显著成果。而对蛋清酶解 产物抗氧化性的研究相对较少，更缺乏系统性。

发明内容

本发明旨在提供了一种高活性蛋清抗氧化肽的制备工艺。

本发明提供如下技术方案：

一种高活性蛋清抗氧化肽的制备工艺，包括以下步骤：

(1)取鲜蛋清粉加水溶解，再加入到磷酸盐缓冲液中配制成蛋 清蛋白悬浊液，在72-85℃保持15min，并不断搅拌使蛋清蛋白变性， 冷却至室温，按10000U/g蛋白的比例向上述蛋清液中加入碱性蛋白 酶进行水解；

(2)步骤(1)经碱性蛋白酶解结束后，加入胃蛋白酶水解，反 应后于沸水浴中灭酶，冷却至室温后调pH值至5.0-6.0，离心并收 集上清液，得到蛋清酶解液；

(3)将步骤(2)所得蛋清酶解液进行超滤，收集分子量＜2.5k Da的组分，真空浓缩后冷冻干燥得蛋清蛋白抗氧化肽粗品；

(4)取步骤(3)所得蛋清蛋白抗氧化肽粗品经SephadexG-25 凝胶柱层析，洗脱液为NaCl溶液，收集、真空浓缩并冷冻干燥洗脱 组分，即可获得高活性蛋清蛋白抗氧化肽。

所述步骤(1)中磷酸盐缓冲液为0.05mol/L、pH8.5。

所述步骤(2)中沸水浴灭酶的时间为8-15min。

所述步骤(2)中离心条件为3000-4500r/min，离心15-20min。

所述步骤(3)中真空浓缩浓缩至浓度为15-22mg/mL，所述步 骤(4)中的浓缩至浓度为8-12mg/mL。

所述步骤(4)中冷冻条件为-12-0℃。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明采用酶解、超 滤、凝胶层析等生物技术手段，方法过程简单，反应条件温和，成 本低，产物活性高易溶于水，对环境没有任何污染；同时降低了蛋 白的抗原性，改善其功能特性，还可抑制和清除自由基，为提高蛋 清蛋白附加值、鸡蛋深加工及应用开辟新途径，市场前景广阔。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清 楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例， 而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员 在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发 明保护的范围。

一种高活性蛋清抗氧化肽的制备工艺，包括以下步骤：

(1)取鲜蛋清粉加水溶解，再加入到磷酸盐缓冲液中配制成蛋 清蛋白悬浊液，在72-85℃保持15min，并不断搅拌使蛋清蛋白变性， 冷却至室温，按10000U/g蛋白的比例向上述蛋清液中加入碱性蛋白 酶进行水解；

(2)步骤(1)经碱性蛋白酶解结束后，加入胃蛋白酶水解，反 应后于沸水浴中灭酶，冷却至室温后调pH值至5.0-6.0，离心并收 集上清液，得到蛋清酶解液；

(3)将步骤(2)所得蛋清酶解液进行超滤，收集分子量＜2.5k Da的组分，真空浓缩后冷冻干燥得蛋清蛋白抗氧化肽粗品；

(4)取步骤(3)所得蛋清蛋白抗氧化肽粗品经SephadexG-25 凝胶柱层析，洗脱液为NaCl溶液，收集、真空浓缩并冷冻干燥洗脱 组分，即可获得高活性蛋清蛋白抗氧化肽。