[发明专利]检测KRAS基因4号外显子密码子突变的引物对、试剂盒及方法在审
| 申请号： | 201610246832.0 | 申请日： | 2016-04-19 |
| 公开（公告）号： | CN107304442A | 公开（公告）日： | 2017-10-31 |
| 发明（设计）人： | 傅新晖;王婧璇;黄京林;陈志婷;林汉杰;王磊;汪建平 | 申请（专利权）人： | 汪建平;王磊;傅新晖;王婧璇;黄京林;陈志婷;林汉杰 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 广州华进联合专利商标代理有限公司44224 | 代理人： | 曾凤云,万志香 |
| 地址： | 510655 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测 kras 基因 号外 密码子 突变 引物 试剂盒 方法 | ||
1.一种检测KRAS基因4号外显子密码子突变的引物对，其特征在于，所述引物对为：针对117号密码子突变检测的SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2，和/或针对146号密码子突变检测的SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4。
2.一种检测KRAS基因4号外显子密码子突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的引物对。
3.根据权利要求2所述的检测KRAS基因4号外显子密码子突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括饱和荧光染料。
4.根据权利要求3所述的检测KRAS基因4号外显子密码子突变的试剂盒，其特征在于，所述饱和荧光染料为Eva Green。
5.一种检测KRAS基因4号外显子密码子突变的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)、以待检测样品的DNA作为模板，采用权利要求1所示的引物对分别进行荧光定量PCR反应，收集荧光信号，绘制熔解曲线；
(2)、判读待检测样品的熔解曲线。
6.根据权利要求5所述的检测KRAS基因4号外显子密码子突变的方法，其特征在于，步骤(1)针对117号密码子突变检测的荧光定量PCR的反应体系为：DNA模板1-5μL、10×Buffer 2-2.5μL、dNTP 2-2.5μL、Eva Green 1-1.25μL、Mg2+0.8-1.5μL、SEQ ID NO:1引物0.6-1μL、SEQ ID NO:2引物0.6-1μL、Taq酶0.25-0.4μL、无酶水加至20-25μL；针对146号密码子突变检测的荧光定量PCR的反应体系为：DNA模板1-5μL、10×Buffer 2-2.5μL、dNTP 2-2.5μL、Eva Green1-1.25μL、Mg2+0.8-1.5μL、SEQ ID NO:3引物0.6-1μL、SEQ ID NO:4引物0.6-1μL、Taq酶0.25-0.4μL、无酶水加至20-25μL。
7.根据权利要求5所述的检测KRAS基因4号外显子密码子突变的方法， 其特征在于，步骤(1)所述荧光定量PCR的反应程序为：95℃5min→95℃10s、62℃15s、72℃25s，40cycles→95℃1min→40℃1min→熔解温度72-83℃，温度每升高1℃，获取15次荧光信号→40℃10s。
8.根据权利要求5所述的检测KRAS基因4号外显子密码子突变的方法，其特征在于，步骤(1)所述模板的浓度为50-100ng/μL。
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