[发明专利]多核苷酸片段、包含其的表达载体和黑曲霉基因工程菌种及其应用在审
| 申请号： | 201610246462.0 | 申请日： | 2016-04-20 |
| 公开（公告）号： | CN107304431A | 公开（公告）日： | 2017-10-31 |
| 发明（设计）人： | 吕旭新;王骏 | 申请（专利权）人： | 顶尚(香港)有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/56 | 分类号： | C12N15/56;C12N15/80;C12N1/15;C12N9/26;C12R1/685 |
| 代理公司： | 北京天昊联合知识产权代理有限公司11112 | 代理人： | 王静,丁业平 |
| 地址： | 中国香*** | 国省代码： | 香港;81 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 多核苷酸 片段 包含 表达 载体 曲霉 基因工程 菌种 及其 应用 | ||
1.一种多核苷酸片段，包含黑曲霉(Aspergillus niger)丙酮酸激酶启动子、和与该黑曲霉丙酮酸激酶启动子有效连接的黑曲霉α-葡萄糖转苷酶基因。
2.根据权利要求1所述的多核苷酸片段，其中所述多核苷酸片段还包含与所述黑曲霉α-葡萄糖转苷酶基因有效连接的终止子。
3.根据权利要求1所述的多核苷酸片段，其中所述多核苷酸片段还包含与所述黑曲霉α-葡萄糖转苷酶基因有效连接的抗性筛选基因。
4.根据权利要求1所述的多核苷酸片段，其中所述多核苷酸片段在5’至3’方向上依次包含彼此有效连接的黑曲霉丙酮酸激酶启动子、黑曲霉α-葡萄糖转苷酶基因、终止子和抗性筛选基因。
5.根据权利要求2或4所述的多核苷酸片段，其中所述终止子为trpC基因终止子。
6.根据权利要求3或4所述的多核苷酸片段，其中所述抗性筛选基因为潮霉素B基因。
7.根据权利要求6所述的多核苷酸片段，其中所述潮霉素B基因中的NdeI酶切位点被去除。
8.根据权利要求1所述的多核苷酸片段，其中所述多核苷酸片段具有序列表SEQ ID No.2所示的核苷酸序列。
9.一种表达载体，其含有权利要求1-8中任一项所述的多核苷 酸片段。
10.根据权利要求9所述的表达载体，其中所述表达载体含有包含酶切位点HindIII、NdeI、BglII、SnaBI和PstI的多克隆位点片段，并且所述多核苷酸片段位于所述多克隆位点片段中。
11.根据权利要求10所述的表达载体，其中所述表达载体在5’至3’方向上依次包含所述HindIII、所述黑曲霉丙酮酸激酶启动子、所述NdeI、所述黑曲霉α-葡萄糖转苷酶基因、所述BglII、所述终止子、所述SnaBI、所述抗性筛选基因和所述PstI。
12.根据权利要求10所述的表达载体，其中所述多克隆位点片段具有序列表SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。
13.根据权利要求9所述的表达载体，其中所述表达载体为直链状。
14.一种黑曲霉(Aspergillus niger)基因工程菌种，其特征在于，其基因组DNA中插入有权利要求1-8中任一项所述的多核苷酸片段。
15.权利要求14所述的黑曲霉(Aspergillus niger)基因工程菌种用于生产α-葡萄糖转苷酶的应用。
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