[发明专利]利用SSR分子标记进行仁用杏种质鉴定的方法

说明书

本发明涉及一种利用特异SSR分子标记结合荧光毛细管电泳检测技术对仁用杏种质鉴定的方法，包括如下步骤：利用分子标记引物PCR扩增标准种质；利用分子标记引物PCR扩增目标种质，目标种质即为待鉴定的种质；将以上两个步骤得到的扩增结果利用毛细管电泳检测技术检测后进行比对，根据比对结果是否一致进行种质鉴定，其中，所用的分子标记选自如下SSR标记，UDP98‑409、UDP98‑406、UDP97‑401、pchgms12、MA039a、MA020a、BPPCT002、BPPCT007和BPPCT008，所述SSR分子标记的正向引物序列和反向引物序列依次如SEQ ID NO:1‑18所示。本发明还涉及以上用到的SSR引物以及应用所述SSR引物构建的仁用杏遗传多样性分析方法。

技术领域

本发明涉及一种仁用杏种质鉴定的方法，特别是涉及一种利用特异SSR分子标记结合荧光毛细管电泳检测技术进行仁用杏种质鉴定的方法。

背景技术

仁用杏(Kernel-using apricots)又称“大扁杏”(俞德浚等，1984)，属蔷薇科杏属，仁大、出仁率高、饱满、杏仁味香甜或无苦味，是以产杏仁为主的我国特有杏种质资源(张加延和张钊，2003)。目前，生产栽培中主栽品种以优一、三杆旗、围选一号、龙王帽和一窝蜂等品种为主，仁用杏适应性强，栽培范围广，具有经济价值高(张睿和魏安智，2005)和广阔的开发利用前景。

长期以来仁用杏不同地区之间引种混乱或地方品种没有准确学名，且一些品种在形态上类似，传统的形态分类法很难满足仁用杏品种的鉴定，使仁用杏出现“同物异名”、“同名异物”现象，随着现代分子生物学技术的快速发展,分子标记技术已广泛应用在物种起源、种质鉴定、遗传图谱构建和分子标记辅助育种(韩晓颖和梁英海,2009；张靖国和胡红菊,2009)等研究领域，其中，SSR(simple sequence repeat)标记具有多态性丰富、共显性遗传等优点，在杏资源中也得到广泛的应用(R.Sa′nchez-Pe′rez et al.，2005；HediaBourguiba et al.，2010；张淑青和刘冬成，2010；陈娇和王小蓉，2013；Zhe Wang et al.，2014；)，但对于仁用杏品种鉴别及指纹图谱构建，在SSR标记基础上研究的报道少见；与此同时，应用RAPD标记技术对鉴别白玉扁、龙王帽、一窝蜂和优一等4个仁用杏品种也较困难(王玉柱等，2006)。

发明内容

本发明为了解决上述问题而提供了一种利用特异SSR分子标记进行仁用杏种质鉴定的方法，该方法所利用的SSR分子标记鉴别能力强且数量合适，能够覆盖主要仁用杏种质资源的遗传多样性。

本发明提供了一种利用SSR分子标记进行仁用杏种质鉴定的方法，包括如下步骤：利用分子标记引物PCR扩增标准种质；利用分子标记引物PCR扩增目标种质，目标种质即为待鉴定的种质；将以上两个步骤得到的扩增结果利用毛细管电泳检测技术检测后进行比对，根据比对结果是否一致进行种质鉴定，所用的分子标记选自如下SSR标记：UDP98-409、UDP98-406、UDP97-401、pchgms12、MA039a、MA020a、BPPCT002、BPPCT007和BPPCT008，UDP98-409的正向引物和反向引物分别如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示，UDP98-406的正向引物和反向引物分别如SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示，UDP97-401的正向引物和反向引物分别如SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示，pchgms12的正向引物和反向引物分别如SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8所示，MA039a的正向引物和反向引物分别如SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10所示，MA020a的正向引物和反向引物分别如SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：12所示，BPPCT002的正向引物和反向引物分别如SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：14所示，BPPCT007的正向引物和反向引物分别如SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：16所示，BPPCT008的正向引物和反向引物分别如SEQ ID NO：17和SEQ ID NO：18所示。