[发明专利]用于猪肉溯源的DNA条形码编制方法及溯源方法

权利要求书

1.一种用于猪肉溯源的DNA条形码编制方法，其特征在于，其包括步 骤：

1)提取猪个体组织中的基因组DNA；

2)以基因组DNA为模板进行PCR扩增，分别使用对应的引物对基因 ADAMTS、DAZL、FBXO32、FUT1、MC4R、MyoG、NR4A1分别扩增1 个SNP位点、对基因PSMB扩增2个SNP位点，得到不同的扩增片段；

3)RFLP分析，将扩增片段分别使用对应的限制性内切酶进行酶切反应， 再用琼脂糖凝胶电泳检测，根据电泳结果判定每个片段对应的基因型，并汇 编成与所述猪个体对应的DNA条形码。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中，PCR扩增使 用的引物序列分别为，

ADAMTS：上游引物序列5′-TGGGGAGATTGTTCCAGAAC-3′，下游引 物序列5′-CTGCAGAACGAAGAAGTAGCC-3′；

DAZL：上游引物序列5′-CGACAGGAATGAGTTTAGCAA-3′，下游引 物序列5′-CCAAAATGGAAGGGAAAAGT-3′；

FBXO32：上游引物序列5′-ATCCCTGAGTGGCATTGCCCAA-3′，下游 引物序列5′-TTCAGCTGCTGCTGCCAGTG-3′-3′；

FUT1：上游引物序列5′-CTTCAGCCAGGGCTCCTTTAAG-3′，下游引 物序列5′-CTTCCTGAACGTCTATCAAGACC-3′；

MC4R：上游引物序列5′-ATGAACTCAACCCATCACC-3′，下游引物序 列5′-TTAATATCTGCTAGACAAATCACAG-3′；

MyoG：上游引物序列5′-TCAGGAAGAACTGAAGGCTG-3′，下游引物 序列5′-GTTTCCTGGGGTGTTGC-3′；

NR4A1：上游引物序列5′-TTCCTCTGGGTCACAACG-3′，下游引物序 列5′-CTCACAGAGTCAATGCCG-3′；

PSMB的两个SNP位点对应引物序列分别为

PSMB(1FR)：上游引物序列5′-AGTTAAGCTCAGTCGTGCAG-3′，下 游引物序列5′-TGAAGTGGATCTTTTCGCAG-3′；

PSMB(2FR)：上游引物序列5′-AGCTGCGAAAAGATCCACTT-3′，下游 引物序列5′-GGTCTTCTAGCACTGCCAGG-3′。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤3)中，酶切反应所 用的限制性内切酶分别为：

ADAMTS：PvuⅡ；

DAZL：MspⅠ；

FBXO32：SnaBⅠ；

FUT1：HhaⅠ；

MC4R：ClaⅠ；

MyoG：MspⅠ；

NR4A1：DdeⅠ；

PSMB(1FR)：Eco81Ⅰ；

PSMB(2FR)：Eco72Ⅰ。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤2)中，PCR扩增条 件为：94℃预变性4min；94℃变性30s，52～64℃退火30s，72℃延伸30s， 共30～40个循环；最后72℃延伸10min。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，各个基因PCR扩增对应的 退火温度为：

6.一种基于DNA条形码的猪肉溯源的方法，其特征在于，包括步骤：

1)在饲养阶段采用权利要求1所述的方法编制猪群中每个猪个体对应 的DNA条形码，将每个猪个体的DNA条形码和来源信息一一对应录入形 成数据库；

2)提取待溯源的猪肉组织并采用权利要求1所述的方法编制DNA条形 码，再与所述数据库中的DNA条形码比对识别，进而关联得到待溯源的猪 肉的来源信息。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述猪为杜洛克、大白和 长白猪。

8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述来源信息包括猪品种、 耳号记录、生长记录、配种记录、繁殖记录。