[发明专利]一种灭活的寨卡病毒疫苗

权利要求书

1.一种制备灭活的寨卡病毒疫苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)利用为载体培养细胞技术培养Vero细胞，当细胞生长成致密单层时，按照MOI为0.05-0.3接种寨卡病毒工作种子，培养温度为35-37℃，培养时间为72-96小时；

(2)将病毒培养液澄清过滤后收获病毒液，单次收获液中加入终浓度为100-400μg/ml的甲醛，37℃，灭活4-7天；

所述病毒培养液为M199与DMEM/F12按照体积比1：1混合得到；

所述病毒液澄清是将病毒液经连续3级孔径为3-0.8 μm、0.8-0.65 μm、0.65-0.22μm的滤芯过滤或离心，离心转速为2000-5000 rpm，离心时间为0.5-4个小时；

(3)灭活的病毒液超滤浓缩，浓缩后的病毒液采用蔗糖密度区带离心；

(4)离心产物超滤脱糖，得到脱糖液；将脱糖液进行离子交换，得到层析液；层析液进行浓缩、除菌即为原液；

(5)将原液稀释，至200-3200U/ml，与佐剂按照1:1等体积混匀，得到寨卡病毒抗原含量为100-1600U/ml，且总蛋白含量低于20μg/ml的疫苗。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)病毒液浓缩倍数为10-100倍，膜包可截留分子质量为100-300KD。

3.如权利要求1-2任一所述的方法，其特征在于，步骤(3)的蔗糖密度区带离心方法为：依次从离心机边孔以50-100rpm依次泵入超离缓冲液，超滤浓缩后的病毒液,低浓度蔗糖溶液，最后以50-150rpm泵入高浓度蔗糖溶液直至中孔流出液体离心转速为28000-35000rpm，离心时间为：6-20小时，离心温度为2-8℃；

低浓度蔗糖溶液蔗糖质量百分比为25％-45％，高浓度蔗糖溶液蔗糖质量百分比为55％-60％，超离缓冲液为0.01-0.05M PBS，pH值为：6.0-7.5。

4.权利要求1-3任一所述方法制备得到的寨卡病毒疫苗。

5.如权利要求4所的寨卡病毒疫苗，寨卡病毒抗原含量为100-1600 U/ml，且总蛋白含量低于20μg/ml；

所述的寨卡病毒疫苗是通过Vero细胞培养的。

6.如权利要求5所述的寨卡病毒疫苗，其特征在于，寨卡病毒抗原含量为800 U/ml。