[发明专利]一种检测同型半胱氨酸的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种检测同型半胱氨酸的试剂盒，其特征在于，包括同型半胱氨酸脱硫酶、反应液、显色液I、显色液Ⅱ、Hcy对照品和质控品血清；所述同型半胱氨酸脱硫酶为保藏号为CCTCCNO：M209255的重组工程菌菌株的分泌产物；所述反应液为添加有1umol/L～100mmol/L的1、4-二硫苏糖醇或三羧乙基膦0.1umol/L～10mmol/L磷酸吡哆醛、pH7.5～10.0的磷酸钾缓冲溶液；所述显色剂Ⅰ为含有1～100mmol/L的二甲基对苯胺硫酸盐的1mol/L的H₂SO₄溶液；所述显色液Ⅱ为0.001～1mol/L的Fe(NH₄)₂SO₄溶液。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，同型半胱氨酸脱硫酶为液体酶溶液或冻干粉末。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，同型半胱氨酸脱硫酶为冻干粉末的制备方法为：

S1.同型半胱氨酸脱硫酶溶液在冻干前加入保护剂进行保护，保护剂配方为：5mmPBS缓冲液、10umol/L的PLP、2％甘露醇、1％蔗糖、15mmol/L的甘氨酸；

S2.将加入保护剂的同型半胱氨酸脱硫酶溶液冷冻至-10℃～-70℃进行预冻，后保温2～8小时；

S3.抽真空，加热至-20℃～-40℃进行升华干燥，升华干燥过程至升华界面达到瓶底并消失，再保温2h之后结束；

S4.再加热至10℃～50℃进行解析干燥，升温后再保温4～6小时，最终获得稳定性高的酶粉。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，S2中冷冻至-40℃～-50℃进行预冻，后保温4～6小时。

5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，S3中抽真空使压力到达15～20pa；升温的时间为4～10小时。

6.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，S4中加热至15℃～25℃进行解析干燥，升温的时间为5～9小时。

7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述显色剂Ⅰ为含有1～10mmol/L的二甲基对苯胺硫酸盐的1mol/L的H₂SO₄溶液。

8.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述显色液Ⅱ为0.1～0.5mol/L的Fe(NH₄)₂SO₄溶液。

9.利用权利要求1所述试剂盒检测同型半胱氨酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：向待测样品和标准品中分别加入反应液，37℃水浴锅中反应5分钟，再分别加入显色液反应10分钟，测定反应后的样品和对照品在670nm的吸光值；按照下列公式计算待测样品中同型半胱氨酸的浓度；

样品浓度＝样品吸光度/标准吸光度×标准浓度；

其中，显色液为显色液Ⅰ和显色液Ⅱ按照10:1的体积比混合而成；所述样品：

反应液：显色液的体积比为1：5：1。