[发明专利]一种高效获得重组蛋白的大肠埃希菌可溶性表达载体

权利要求书

1.一种高效获得重组蛋白的大肠埃希菌可溶性表达载体，通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导外源蛋白质表达，其特征是：载体结构中同时含有内含肽基因与硫氧还蛋白基因，且所表达的内含肽与硫氧还蛋白用六聚组氨酸标记。

2.根据权利要求1所述的表达载体，其特征是：所述载体包含如下结构基因，按顺序为六聚组氨酸标签-柔性连接肽-几丁质结合域-内含肽复合体编码基因、外源目的基因、核糖体结合位点、硫氧还蛋白-柔性连接肽-六聚组氨酸标签复合体编码基因。

3.根据权利要求1或2所述的表达载体的构建方法，其特征在于，分别获取内含肽与硫氧还蛋白的核酸序列，通过设计合适的引物，对内含肽和硫氧还蛋白的核酸序列进行优化和修饰，以通用型表达载体为母核，通过酶切、酶连，获得特征结构序列依次为六聚组氨酸标签-柔性连接肽-几丁质结合域-内含肽复合体编码基因、外源目的基因、核糖体结合位点、硫氧还蛋白-六聚组氨酸标签复合体编码基因的重组可溶性表达载体。

4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，在内含肽基因序列的5'端依次连接上几丁质结合域基因、柔性连接肽基因、六聚组氨酸标签基因。

5.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，在硫氧还蛋白基因3'端进行六聚组氨酸基因标记。

6.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述的外源目的基因的结构中含有二硫键。

7.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所用的限制性核酸内切酶为BspI、BamHI，宿主菌为BL21。

8.根据权利要求3所述的构建方法，其特征是：外源目的基因与硫氧还蛋白基因非融合表达。

9.权利要求1或2所述的表达载体在高效获得重组蛋白中的应用。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的重组蛋白不含任何标签。