[发明专利]一种生物法制备N-(2-((2R,4R)-4,6-二羟基四氢-2H-吡喃-2-基)-乙基)-2-苯乙酰胺的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物制药和生物化工技术领域，尤其涉及一种生物法制备 N-(2-((2R,4R)-4,6-二羟基四氢-2H-吡喃-2-基)-乙基)-2-苯乙酰胺的方法。

背景技术

N-(2-((2R,4R)-4,6-二羟基四氢-2H-吡喃-2-基)-乙基)-2-苯乙酰胺(式1) 是降血脂他汀类药物重要的手性药物中间体。目前其尚无公开的制备方法报道。

文献ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences,2004,V110(16): 5788-5793及相关专利WO2004027075和WO2009019561报道了利用2-脱氧核 糖-5-磷酸醛缩酶(DERA，式2)制备系列手性二羟基四氢吡喃类化合物的方法， 该酶对系列模式底物中较小官能团(如氢、氯、叠氮等)有活力，但是未发现 其对较大官能团的活力。

发明内容

本发明的目的是提供一种生物法制备N-(2-((2R,4R)-4,6-二羟基四氢-2H- 吡喃-2-基)-乙基)-2-苯乙酰胺的方法。

为达到上述目的，本发明采用的技术方案是：一种生物法制备 N-(2-((2R,4R)-4,6-二羟基四氢-2H-吡喃-2-基)-乙基)-2-苯乙酰胺的方法，以 N-(3-丙酮基)-2-苯乙酰胺为底物，使其在助溶剂、2-脱氧核糖-5-磷酸醛缩酶 的存在下，在15℃～25℃下、pH为5～9的缓冲溶液中，加入乙醛进行缩醛反应， 生成所述的N-(2-((2R,4R)-4,6-二羟基四氢-2H-吡喃-2-基)-乙基)-2-苯乙酰 胺，其中，起始反应体系中，底物的浓度控制在5～20g/L间，所述的助溶剂为 二甲基亚砜、吐温-60、聚乙二醇、聚乙二醇辛基苯基醚中的一种或多种的组合， 且所述助溶剂的投料体积为反应体系总体积的5～15％，所述的2-脱氧核糖-5-磷 酸醛缩酶与底物的投料质量比为0.5～2:1，

所述的N-(3-丙酮基)-2-苯乙酰胺的结构式为：

所述的N-(2-((2R,4R)-4,6-二羟基四氢-2H-吡喃-2-基)-乙基)-2-苯乙酰 胺的结构式为：

优选地，所述的2-脱氧核糖-5-磷酸醛缩酶为购自苏州汉酶生物技术有限公 司的牌号为EW0694的2-脱氧核糖-5-磷酸醛缩酶。

优选地，所述的助溶剂为二甲基亚砜时，其投料体积为反应体系总体积的 10～12％。

优选地，所述的缓冲溶液为磷酸盐缓冲溶液。

优选地，起始反应体系中，所述底物的浓度控制在10～20g/L间。

优选地，具体实施过程如下：将所述的底物、助溶剂、2-脱氧核糖-5-磷酸 醛缩酶加入到所述的缓冲溶液中，在15℃～25℃下搅拌，然后恒速加入乙醛进行 缩醛反应，HPLC监测反应进程，反应完全后，加入乙酸乙酯进行萃取多次，合 并有机相、浓缩、柱层析分离得到所述的N-(2-((2R,4R)-4,6-二羟基四氢-2H- 吡喃-2-基)-乙基)-2-苯乙酰胺。

由于上述技术方案的运用，本发明与现有技术相比具有下列优点：本发明 的生物法制备N-(2-((2R,4R)-4,6-二羟基四氢-2H-吡喃-2-基)-乙基)-2-苯乙 酰胺，通过N-(3-丙酮基)-2-苯乙酰胺与乙醛在2-脱氧核糖-5-磷酸醛缩酶的作 用下发生缩醛反应，以制得目标产物，为此，该方法操作简单、所得产物纯度 高、收率好。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步详细的说明，但本发明并不限于以 下实施例。实施例中采用的实施条件可以根据具体使用的不同要求做进一步调 整，未注明的实施条件为常规实验中的条件。

实施例1(酶筛选)

5mL离心管中加入40mg底物N-(3-丙酮基)-2-苯乙酰胺，1.8mL磷酸盐 缓冲溶液(0.1M，pH7.5)，0.2mLDMSO，0.035mL乙醛，不同DERA酶粉40mg (购自苏州汉酶生物技术有限公司的牌号分别为EW0691，EW0692，EW0693， EW0694)，室温下开始搅拌，间隔不同时间，HPLC检测底物转化率如表1所示：

表1