[发明专利]一种提取拟南芥种子中总RNA的方法在审
| 申请号： | 201610201835.2 | 申请日： | 2016-03-31 |
| 公开（公告）号： | CN105671032A | 公开（公告）日： | 2016-06-15 |
| 发明（设计）人： | 甘银波;吴敏洁;颜安;盛喆承;于涛 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 | 代理人： | 胡红娟 |
| 地址： | 310027 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提取 拟南芥 种子 rna 方法 | ||
1.一种提取拟南芥种子中总RNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)在液氮冷却条件下研磨拟南芥种子，得拟南芥种子冻干粉；
(2)将拟南芥种子冻干粉加入到预热的提取缓冲液中，再加入β-巯基乙醇，涡旋混合，离 心，吸取上清液，得第一离心上清液；
(3)第一离心上清液中加入氯仿和水饱和酚，涡旋混匀，18～25℃条件下离心，吸取上清液， 得第二离心上清液；
(4)第二离心上清液中加入氯化锂，静置，离心，得第一离心沉淀；
(5)用DEPC水溶解第一离心沉淀，加乙酸钠和异丙醇，静置，离心，得第二离心沉淀；
(6)将第二离心沉淀经醇洗，干燥，复溶即得所述拟南芥种子总RNA。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述提取缓冲液的成分为：100mMTris-HCl， 10mMEDTA，2％十二烷基硫酸锂，0.6MNaCl，0.4M柠檬酸三钠。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，每百毫克拟南芥种子冻干粉中加 入提取缓冲液1～3mL，β-巯基乙醇50～150μL。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，提取缓冲液的预热温度为40～60℃。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，涡旋振荡1～2min。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，氯仿添加量为1倍体积的第一离 心上清液，水饱和酚添加量为1倍体积的第一离心上清液。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述氯化锂的终浓度为2～3M。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，-80℃条件下静置15min～2h。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(5)中，所述乙酸钠的终浓度为0.15～0.3M。
10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)和(5)中，离心的条件为18～25℃。
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