[发明专利]一种草莓花青素调节基因功能标记

权利要求书

1.一种草莓花青素调节基因功能标记，其特征是，具体步骤如下：（1）草莓花青素调节基因的序列分析：

草莓花青素调节基因MYB10在红色和黄色果实中仅仅存在一个单核苷酸差异，该核苷酸位于MYB10基因第一个外显子上第35个核苷酸，在红色果实中为G，而在黄果为C；

（2）草莓花青素调节基因功能标记的方法：

根据上述红色和黄色草莓中编码区第一个外显子区域存在的单核苷酸突变开发了草莓花青素调节基因的功能标记，该功能标记的正反引物序列为：

上游引物（F）：5＇－TTCGGTGTGAGAAAAGGTGAAT－3＇

下游引物（R）：5＇－CTGTTTAAGCCTGCAAGTACAG－3＇

该功能标记经PCR扩增、酶切和电泳后，在红色果实草莓中显示200bp的片段，而在黄色草莓果实中显示180bp的片段；

（3）功能标记的应用方法

所述的引物序列在筛选红色和黄色草莓果实中的应用，分别进行PCR扩增、酶切和琼脂糖凝胶分析；

PCR扩增的体系和反应程序为：

20μlPCR反应体系为：模板DNA50ng，Taq酶1U，10μmol的上、下游引物各0.8μl，0.3μlof10mMdNTPs，2.0μlof10×PCRbuffer，1.2μlof25mMMgCl₂，用无菌蒸馏水补充反应体系至20μl；

PCR反应程序为：先95℃3min；然后95℃30s，55℃30s，72℃20s，共33个循环；最后72℃5min，4℃保存；

酶切体系、时间和温度为：

20μl酶切体系为：PCR产物5μl，内切酶HinfI0.2μl，内切酶缓冲液2μl，最后用无菌蒸馏水补充反应体系至20μl；酶切反应时间为3小时，温度为37℃，扩增产物在3%的琼脂糖胶电泳分离；

（4）根据上述草莓花青素调节基因功能标记的方法，其特征在于可用于对草莓果实颜色进行早期辅助选择，加快育种进程。