[发明专利]一种苹果中甲基硫菌灵残留量的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及食品安全检测领域，具体是一种苹果中甲基硫菌灵残留量的检测方 法。

背景技术

苹果是最常见的水果之一。苹果味甜，口感爽脆，且富含丰富的营养，是世界四大 水果之冠。苹果的性味温和，含有丰富的碳水化合物、维生素和微量元素，有糖类、有机酸、 果胶、蛋白质、钙、磷、钾、铁、维生素A、维生素B、维生素C和膳食纤维，另含有苹果酸，酒石 酸，胡萝卜素，是所有蔬果中营养价值最接近完美的一个。

为了使苹果在储存期预防真菌类病害，需要对苹果进行保鲜处理。目前虽然已有 涂膜、减压处理、高压处理、天然保鲜剂、生物保鲜剂等苹果保鲜新技术的研究与报道，但受 到技术、成本等因素影响，我国对于苹果防腐保鲜处理普遍使用的仍是化学防腐保鲜剂。苹 果在进行保鲜时，最常用的化学防腐保鲜剂为甲基硫菌灵，又名甲基托布津，是一种广谱性 内吸低毒杀菌剂，具有内吸、预防和治疗作用。目前，针对甲基硫菌灵的检测分析方法，已报 道的主要有高效液相色谱、气相色谱及酶联免疫法等。气相色谱法或液相色谱法易受杂质 干扰，且灵敏度低；酶联免疫方法操作过程繁琐，且条件要求苛刻。

发明内容

本发明的目的在于提供一种苹果中甲基硫菌灵残留量的检测方法，以解决上述背 景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种苹果中甲基硫菌灵残留量的检测方法，步骤如下：

1)标准储备液的配制，用十万分之一天平准确称取甲基硫菌灵标准品10mg于烧杯 中，精确至0.1mg，加乙腈溶解并定容至10mL容量瓶中，配制成浓度为1000μg/mL的单标储备 液，在冰箱中1℃～4℃保存；

2)标准工作溶液的配制，准确移取1mL单标储备液置于100mL棕色容量瓶中，用乙 腈定容至刻度，配成10μg/mL的标准中间液，根据需要移取适量标准中间液，用乙腈-水溶液 稀释成2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL的标准工作溶液，各种标准溶 液密封保存于1℃～4℃冰箱中；

3)试样制备，取1000g带皮苹果样品经四分法选取一定量的样本，经粉碎或组织捣 碎机匀浆，获得待测样品，装入样品袋中，密封、标记、1℃～4℃冰箱中冷藏待用；

4)样品提取，取待测样品，加入5～8倍量的乙醚，涡旋振荡2～3min后再超声提取8 ～10min，加入2～4g氯化钠，再次涡旋4～5min，5500～6000r/min离心10～12min；再分2次 加入8～10倍量乙醚，涡旋振荡6～7min后5500～6000r/min离心12～15min，合并有机相，并 采用平行蒸发仪进行第一次浓缩，获得一次浓缩液；

5)样品洗脱，将活性炭小柱先用洗脱液进行活化，然后将一次浓缩液倒入活性炭 小柱后用洗脱液洗脱，获得洗脱收集液，所述洗脱液为乙酸乙酯和丙酮的等体积混合液，用 量为一次浓缩液体积的10～12倍；

6)二次浓缩及过滤，将洗脱收集液采用氮气吹促进洗脱液挥发的方式进行第二次 浓缩，获得二次浓缩液，二次浓缩液采用甲醇定容至2ml后，采用0.30μm滤膜过滤，获得滤 液，滤液供液质联用仪测定；

7)色谱测定；

8)质谱测定；

9)仪器测定，样品进样的程序为：试剂空白、标准工作曲线、样品空白、样品添加与 实际样品，重复以上步骤；

10)定量方法，按步骤9)进样，用色谱工作站建立标准工作曲线，样品采用工作曲 线定量。

作为本发明再进一步的方案：步骤2)中，乙腈-水溶液含0.15％甲酸，乙腈-水溶液 中乙腈与水的体积比为1:1。

作为本发明再进一步的方案：步骤8)中，甲基硫菌灵的定量离子对为343、113/ 151、074，定性离子对为343、131/118、123，S-lens电压为76V，碰撞电压为18；51，扫描模式 为positive，保留时间为7.6min，离子源为电喷雾离子源，扫描方式为正负切换扫描，检测 方式为多反应监测，毛细管温度为350℃，蒸发温度为300℃，电喷雾电压为+3500(-3000)V， 鞘气为30arb，辅助气为10arb，碰撞气为氩气。

作为本发明再进一步的方案：步骤7)中，色谱柱为HypersilGOLDC18，膜厚为1.9μ m，内径为2.1mm×50mm，柱温为35℃，进样量为2μL，采用梯度洗脱。