[发明专利]狂犬病毒DRV-AH08株的先导RNA及其在制备预防与治疗狂犬病毒的药品中的应用

说明书

本发明公开了一种狂犬病毒DRV‑AH08株的先导RNA及其在制备预防与治疗狂犬病毒的药品中的应用。首先我们确定了先导RNA的长度，选用出现频率最高的64nt长度的先导RNA进行后续试验，我们发现在细胞内和鼠脑内过表达先导RNA，均能抑制狂犬病毒的复制。同时，在已经感染了狂犬病毒的细胞内过表达先导RNA，能明显抑制狂犬病毒的复制；而在已经感染了狂犬病毒的小鼠上过表达先导RNA，能明显推迟小鼠发病时间，并明显提高小鼠存活率。综上所述，先导RNA不仅在狂犬病的预防方面有潜在的应用价值，还在狂犬病暴露后治疗中有巨大的药用价值。

技术领域

本发明涉及公共卫生和预防兽医学领域，具体地指一种狂犬病毒DRV-AH08株的先导RNA及其在制备预防与治疗狂犬病毒的药品中的应用。

背景技术

狂犬病是一种人兽共患传染病，所有温血动物都能感染，至今仍然在全世界广泛流行。2002～2007年，全国狂犬病死亡11198例，占同期各种传染病病死数的30％，高居所有法定传染病病死数之首。因此狂犬病与艾滋病、病毒性肝炎、结核病一样，已成为危害我国人口健康与公共卫生安全的重大传染病。狂犬病一旦发病，其致死率几乎为100％，因而控制狂犬病的主要手段是预防。免疫预防分为暴露前和暴露后免疫。暴露前免疫是给经常与狂犬病病毒接触的人接种疫苗。暴露后免疫是给被患狂犬病动物或者被疑似狂犬病动物咬伤，舔伤，抓伤的人接种疫苗。对伤势过重者还要用抗狂犬病血清进行治疗。但是暴露后免疫和治疗一定要尽早、及时，一旦出现临床症状，就预示着暴露后免疫和治疗的失败和患者的死亡。

狂犬病毒因其高致死率，对公共卫生安全危害极大。狂犬病毒感染后病毒通过神经进入血脑屏障，神经细胞坏死和凋亡不明显，病理变化不典型，甚至有的病例其脑组织标本无炎症反应，狂犬病的发病机理始终不清楚，为发病后治疗带来极大困难，目前狂犬病暴露后的治疗只有使用含有中和抗体的抗血清这一种方法，而抗血清价格昂贵，而且可能产生过敏性休克和血清病等不良反应，这使得抗血清的使用有一定的局限性。

发明内容

本发明目的是针对现有技术存在的缺陷，提供了一种狂犬病毒DRV-AH08株的先导RNA及其在制备预防与治疗狂犬病毒的药品中的应用。

为实现上述目的，本发明提供的一种狂犬病毒DRV-AH08株的先导RNA，所述先导RNA的核苷酸序列

为下述长短不一的RNA核苷酸序列中任意一种，分别为

先导RNA1的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，

先导RNA2的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，

先导RNA3的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，

先导RNA4的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示，

先导RNA5的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示，

先导RNA6的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示，

先导RNA7的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示。

先导RNA(Leader RNA)是狂犬病毒感染宿主后产生的一条单股正链的非编码小RNA，长度约64nt，先导RNA既不加帽也无poly A尾巴，是狂犬病毒感染后最早的转录产物。本发明利用先导RNA这一特性，在狂犬病毒感染后，用先导RNA来进行治疗，发挥类似于RNAi的作用来抑制狂犬病毒的复制，也尚未有相关报道。

本发明还提供了一种重组真核表达载体AAV-U6，所述重组真核表达载体AAV-U6是在真核表达载体AAV的NotI酶切位点之间插入U6-BbsI-CMV-mcherry片段得到的，其中，U6-BbsI-CMV-mcherry片段的核苷酸序列如SEQ ID No.8所示。

上述重组真核表达载体AAV-U6的构建方法，包括以下步骤：