[发明专利]在8-9月份基于短截枝条获取外植体以提高砀山酥梨组培苗成活率的方法

说明书

一种在8‑9月份基于短截枝条获取外植体以提高砀山酥梨组培苗成活率的方法，该方法是在8‑9月份，选择树龄20年以内的梨树，并选择生长健壮无病虫害一年生的背上枝或徒长枝，在其芽体饱满充实处进行短截，诱发梨植株在剪口下萌发新梢，待新梢生长8㎝～10㎝时，剪下该新梢作为组培外植体；外植体经消毒、诱导培养、增殖分化培养、接穗培养和嫁接等步骤获得砀山酥梨种苗。本发明方法简单，操作容易，不增加其他成本；根据组培计划，需要多少外植体，就提前处理多少枝条。在8‑9月份可以通过本发明方法获得充足的砀山酥梨再生植株，满足利用基因工程进行种质改良研究或砀山酥梨规模化种苗繁殖等；且本发明组培方法成活率达96％以上。

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其涉及一种梨组织培养的外植体获取的方法，具体说是一种在8-9月份基于短截枝条获取外植体以提高砀山酥梨组培苗成活率的组培方法。

背景技术

砀山酥梨原产安徽省砀山县，至今有2000多年的历史。砀山酥梨耐盐碱、耐瘠薄、耐贮藏、酥脆多汁等等综合性状优良，至今无其他品种替代。目前，仅砀山酥梨这一个品种的栽培面积仍占全国梨生产总面积20％以上，但在长期的无性繁殖过程中，感染并积累了多种病毒，严重影响梨果的产量和质量；随着分子生物学领域技术迅猛发展，利用基因工程进行种质改良研究也进一步深入。无论是种苗脱毒纯化或利用基因工程进行种质改良研究等，都需要进行大量的砀山酥梨组织培养，而外植体的选择是组织培养的第一步，选材的部位、时期等都会影响到外植体的成活率。梨的组织培养分为茎尖培养、茎段培养、胚培养、花药培养和叶片培养，考虑到成活率、取材是否容易以及生产成本等诸多因素，目前在梨的组织培养中应用比较广泛的是采取旺盛生长的新梢作为外植体，取其茎尖作接种材料培养，由于此期外植体的酚类物质积累较少，多酚氧化酶活性弱，外植体不容易褐化，成活率最高。

砀山酥梨是落叶果树，具有符合自身特性的品种物候期，其新梢旺盛生长期一般在4月上旬至5月上旬，到6月中旬基本停止生长，并且砀山酥梨枝条很少有自然第二次再抽生新梢的现象。因此，在生产上或实验室所需组培，一般只能在每年的4月上旬至5月上旬能获得大量优良外植体，满足当季组培需要。而砀山酥梨在组培时增殖倍数较低，一般不超过3倍，并且最多继代培养6代，否则影响其生长势和成活率。也因此，无论利用基因工程进行种质改良研究或砀山酥梨规模化种苗繁殖等，不能周年提供足够的组培苗严然已成为产业发展的瓶颈。

本项目组经10余年反复试验研究，终于获得一种方法，能在8-9月份获得大量的组培外植体，不增加成本，操作容易，并且能提高砀山酥梨组培苗成活率。

发明内容

本发明的目的是提供一种在8-9月份以短截枝条获取砀山酥梨外植体，并基于该外植体提高砀山酥梨组培苗成活率的组培方法。

本发明解决技术问题采用如下技术方案：

在8-9月份基于短截枝条获得砀山酥梨组培苗的方法，其特征在于，在8-9月份，选择树龄在20年以内的梨树，并选择生长健壮无病虫害一年生的背上枝或徒长枝，在芽体饱满充实处进行短截，诱发梨植株在剪口下萌发新梢，待新梢生长8㎝～10㎝时，剪下该新梢即得组培外植体。

本发明同时提供一种在8-9月份基于短截枝条获取外植体以提高砀山酥梨组培苗成活率的方法，包括外植体获得与消毒及预处理、诱导培养、增殖分化培养、接穗培养和嫁接，其特点在于，

所述外植体获得是指：在8-9月份，选择树龄在20年以内的梨树，并选择生长健壮无病虫害一年生的背上枝或徒长枝，在其芽体饱满充实处进行短截，诱发梨植株在剪口下萌发新梢，待新梢生长8㎝～10㎝时，剪下该新梢即得组培外植体。