[发明专利]在8-9月份基于短截枝条获取外植体以提高砀山酥梨组培苗成活率的方法

权利要求书

1.在8-9月份基于短截枝条获取外植体以提高砀山酥梨组培苗成活率的方法，包括外植体获得与消毒及预处理、诱导培养、增殖分化培养、接穗培养和嫁接，其特征在于，

所述外植体获得是指：在8-9月份，选择树龄在20年以内的梨树，并选择生长健壮无病虫害一年生的背上枝或徒长枝，在其芽体饱满充实处进行短截，诱发梨植株在剪口下萌发新梢，待新梢生长8㎝～10㎝时，剪下该新梢即得组培外植体；

所述外植体的消毒是指：将外植体用洗衣粉浸泡30min后再用流水冲洗1h，然后先放入以W/V计6％Vc溶液中浸泡15min，并不断振荡，再置于超净工作台上，用以V/V计75％的酒精溶液消毒25s，再用无菌水冲洗3次后用以V/V计0.1％的HgCl₂溶液浸泡5～7min，所述的HgCl₂溶液每500mL添加有200μL吐温-80，最后用无菌水冲洗3次，进行外植体预处理；所述外植体预处理是指用经灭菌处理过的剪刀将外植体剪成2cm～3cm的小段，每段带有一个腋芽或者顶芽，之后用无菌滤纸吸干附着在表面的水分，等待接入诱导培养基；

所述诱导培养是指，将预处理后的外植体形态学下端向下接入诱导培养基上，于25±1℃、光照1500Lx～2500Lx；光照时间为12h～16h/d的条件下培养25d～30d，得到分化出芽丛的试管苗；所述诱导培养基配方为MS+1.5～2.0mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+0.2～0.6％AC+30g/L蔗糖+6g/L琼脂，pH值为5.8～6.0；

所述增殖分化培养是指：将诱导培养得到的分化出芽丛的试管苗在继代培养基中培养，促使腋芽和不定芽的萌生，形成大量芽丛，通过将芽丛分割而达到扩繁的目的，所述继代培养基为：MS+1.0～1.5mg/L 6-BA+0.2mg/L IBA+80mg/L PG；继代增殖分化培养每代间隔时间为28d～35d，最多继代培养6代；

所述接穗培养是指：将分化出芽丛的试管苗分割，再逐个芽接入接穗培养基中，于25±1℃、光照1500Lx～2500Lx、光照时间为12h～16h/d的条件下培养30d～35d，使试管苗具有5～7片叶时即可进行嫁接，所述接穗培养基为1/4MS+80mg/L PG+0.5～1.0mg/L IBA+0.3mg/L NAA+0.3mg/L K₂HPO₄+0.1mg/L CaCL₂；

所述嫁接是指：

A、嫁接前炼苗，开瓶，光线由弱渐强，使其试管苗逐渐适应外界环境，然后贴近接穗培养基将试管苗上部全部剪切下来即可作为接穗；

B、嫁接时，将砧木苗从离根茎部3㎝～8㎝处横向切断，再沿着横断面纵切一刀，根据接穗和砧木的粗细可适当调整纵切位置，若接穗和砧木一样粗或接穗粗于砧木，沿着横断面中部纵切一刀，若接穗粗度细于砧木，沿着横断面偏向一侧纵切一刀；然后迅速将接穗楔形部位插入切口，一定要将接穗与砧木一侧韧皮部对齐；最后将接口部位用封口膜缠紧，再用塑料薄膜袋罩上扎严，后期按常规技术管理即可。