[发明专利]一种食用菌蛋白肽-硒螯合物的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种食用菌蛋白肽-硒螯合物的制备方法，属于食品生物技术领域。

背景技术

硒（Se）是人体必需的一种重要矿质元素，具有重要的生理功能，已有的大量研究表明很多种疾病都与硒营养状况密切相关。人体主要是通过饮食获得硒，人工补硒的方法是口服含硒制剂。一般补硒的方法是用无机硒化合物（亚硒酸钠和硒酸钠）制成口服制剂。但是，无机硒强化剂吸收和利用的效果不理想，生物有效性低，而且具有较强的毒副作用，最低致死量相对较小，中毒量与需要量之间范围小，存在较大的安全隐患，因而被严格限制其使用。研究显示，无机硒经生物转化后的有机硒化合物毒性低，吸收率更高，生物利用率和生物活性也更高，在激发免疫反应上比无机硒显著。

食药用菌是一大类有大型子实体的高等真菌，俗称蘑菇或蕈，含有人体所需要的多种营养成分，蛋白质含量非常高，如金针菇的蛋白质含量达20.9%，草菇中蛋白质含量达25.9%，大大超过我们常食的蔬菜和粮食食品，也超过畜禽品的蛋白质含量。食药用菌富含各类氨基酸，如香菇、平菇、银耳等氨基酸总量平均为15.76%（干重），必需氨基酸总量平均为6.43%（干重），其味道鲜美与菇体内含大量游离氨基酸与核苷酸有关。因此，食药用菌中的蛋白水解产生的多肽与普通动植物蛋白相比具有更丰富的生物活性和更高的营养价值。

利用生物技术对食药用菌(香菇、黑木耳、平菇、蟹味菇、茶树菇、茯苓、桑黄、草菇、金针菇、杏鲍菇、银耳、竹荪等)进行蛋白质资源的深加工，进行生物活性肽的筛选和提取分离，然后利用无机硒进行螯合，制备多肽-硒螯合物，将无机硒转变成有机硒。这种食药用菌生物活性多肽-硒螯合物能显著提高硒元素的吸收率和利用率，而且还具有抗氧化、抗菌、免疫调节、降血脂和降血糖等活性，有很高的开发价值和应用前景，同时能提高食药用菌的附加值，为食药用菌资源的利用开辟了新的途径，具有广阔的市场前景。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术存在的缺陷，提供一种食用菌蛋白肽-硒螯合物的制备方法，具有工艺操作简便、安全性高的优点。

本发明的食用菌蛋白肽-硒螯合物的制备方法，包括如下步骤：

（1）利用碱溶酸沉法或硫酸铵沉降法提取食用菌中的蛋白质；

（2）采用蛋白酶对食用菌蛋白进行酶解，灭酶，制备食用菌蛋白多肽复合物溶液；

（3）采用固体高温混合法或者液体螯合法使无机物亚硒酸钠中的硒与食用菌蛋白肽进行螯合，制备食用菌蛋白肽-硒螯合物；

（4）将食用菌蛋白肽-硒螯合物进行冷冻干燥。

具体方法如下：

步骤（1）中，将食用菌超微粉碎，将粉碎后的食用菌与蒸馏水以w/v1：20-60的比例混合，利用0.5-2wt.%NaOH调节pH至9.0-11.0，超声提取10-50min，水浴提取60-120min，温度50-100℃，提取后用纱布过滤，滤液为碱提的食用菌蛋白溶液，用盐酸调节碱提的食用菌蛋白溶液pH至2.5-4.0进行蛋白沉淀，离心得沉淀蛋白，水洗至中性再次离心，将沉淀冷冻干燥即得食用菌蛋白；或者将食用菌超微粉碎，将粉碎后的食用菌与蒸馏水以1：20-60w/v的比例混合，逐步加入固体硫酸铵使硫酸铵的饱和度达40-60%，离心去上清液，得食用菌蛋白沉淀，利用透析法脱盐后冷冻干燥得食用菌蛋白，所述离心沉淀蛋白的离心条件为3000-5000r/min，离心5-10min。

步骤（2）中，将食用菌蛋白溶解在水中使蛋白质量浓度达1.0-5.0%，用0.5-2wt.%的NaOH或KOH溶液将pH调节到7.0-11.0，温度保持在40-60℃，加入1.0-5.0wt.%蛋白酶，水解30-90min，灭酶，得到食用菌蛋白多肽复合物溶液。

步骤（2）中所述酶采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶或复合蛋白酶。

步骤（3）中，将步骤（2）得到的食用菌蛋白多肽复合物溶液冷冻干燥，然后将亚硒酸钠粉末和食用菌蛋白肽冻干粉按照质量比1:6-5:6混合，高温100-150℃加热制备食用菌蛋白肽-硒螯合物；或者将步骤（2）得到的食用菌蛋白多肽复合物溶液与0.5-2mol/L亚硒酸钠溶液混合，两者按体积比为6:1-6:5，搅拌均匀，调节pH3.0-10.0，在30-80℃条件下持续反应1.0-2.0h，反应后冷却，离心分离去除杂质，加入3-5倍体积75-95%的乙醇，沉淀静置12-24h，离心去除上清液，获得食用菌蛋白肽-硒螯合物。

步骤（4）中，螯合反应结束后，食用菌蛋白肽-硒螯合物冷冻干燥。