[发明专利]基于磁性石墨烯纳米复合物的核酸提取方法

权利要求书

1.基于磁性石墨烯纳米复合物的核酸提取方法，其特征在于包括如下步骤：

首先，利用氧化石墨烯表面羧基基团做为连接位点，使其和氨基磁珠连接，从而实现磁性石墨烯纳米复合物的合成；随后，采用裂解液配合蛋白酶K的方法，实现细胞的裂解，释放核酸；通过离心去除细胞碎片后，在上清液中加入磁性石墨烯纳米复合物捕捉核酸；最后，经过磁分离清洗提纯后即得到核酸样品。

2.根据权利要求1所述的基于磁性石墨烯纳米复合物的核酸提取方法，其特征在于：所述的细胞在裂解前需要进行前处理。

3.根据权利要求2所述的基于磁性石墨烯纳米复合物的核酸提取方法，其特征在于：所述的细胞来源于动物细胞、革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、动物组织、动物血液或植物组织。

4.根据权利要求1～3任一项所述的基于磁性石墨烯纳米复合物的核酸提取方法，其特征在于：所述的核酸样品包括DNA和RNA。

5.根据权利要求1～3任一项所述的基于磁性石墨烯纳米复合物的核酸提取方法，其特征在于：所述的核酸样品中加入DNA酶，得到RNA样品。

6.根据权利要求1～3任一项所述的基于磁性石墨烯纳米复合物的核酸提取方法，其特征在于：所述的核酸样品中加入RNA酶，得到DNA样品。

7.根据权利要求3所述的基于磁性石墨烯纳米复合物的核酸提取方法，其特征在于：

所述的动物细胞的前处理，包括如下步骤：

a.对于游离培养的细胞采用离心收集的方式，使细胞聚集于离心管底部，再用PBS缓冲液清洗两次去除残留的细胞培养液即得到细胞沉淀；

b.对于贴壁培养的细胞采用消化液消化或细胞刮刀使细胞脱壁、并游离至培养液中，通过离心收集的方式，使细胞聚集于离心管底部，再用PBS缓冲液清洗两次去除残留的细胞培养液即得到细胞沉淀；

c.向步骤a或b中收集的细胞沉淀中加入Sampleprotector，并浸泡，变性细胞中的RNA酶；

d.去除Sampleprotector，离心收集细胞沉淀，冷冻于-80℃冰箱备用。

8.根据权利要求3所述的基于磁性石墨烯纳米复合物的核酸提取方法，其特征在于：所述的革兰氏阳性菌的前处理，采用方法a和方法b中的一种，包括如下步骤：

a.溶菌酶溶解细胞壁

a)离心收集过液培养的革兰氏阳性菌，去除培养液后，用PBS缓冲液清洗3次，得到菌体沉淀；

b)向步骤a)中收集的细胞沉淀中加入Sampleprotector，并浸泡，变性菌体中的RNA酶；

c)离心收集菌体沉淀，去除Sampleprotector，将所得菌体冷冻于-80冰箱备用；

d)加入溶菌酶，37℃孵育；

b.液氮研磨去除细胞壁

a)离心收集过液培养的革兰氏阳性菌，去除培养液后，用PBS缓冲液清洗3次，得到菌体沉淀；

b)向步骤a)中收集的细胞沉淀中加入Sampleprotector，并浸泡，变性菌体中的RNA酶；

c)将步骤b)中所得的菌体移至研钵当中，倾倒液氮，并剧烈研磨成粉后，收集粉末并冷藏于-80℃冰箱备用；

所述的革兰氏阴性菌的前处理，参照革兰氏阳性菌的前处理的方法a。