[发明专利]一种提高千层塔芽孢移栽成活率的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及种一种提高千层塔(Huperzia serrata(Thunb.)Trev.)芽孢移栽成活率的方法。

背景技术

千层塔(Huperzia serrata(Thunb.)Trev.)为石松目(Lycopodiales)石杉科(Lycopodiaceae)石杉属(Lycopodium L.)多年生草本蕨类植物。具有散瘀消肿、解毒和止痛的功效。1927年我国科技工作者报道了从该植物中分离的石杉碱甲具有横纹肌松弛作用，之后的大量研究发现石杉碱甲是一种高效、低毒、可逆和高选择性的乙酰胆碱酯酶抑制剂。现在，被石杉碱甲及经作为治疗阿尔茨海默病(AD，Alzheimer disease)的药物，同时在美国被用做益智的营养保健品。

但是，千层塔自然资源严重短缺。千层塔生长缓慢，野生状态下千层塔的繁殖主要以孢子繁殖为主，孢子萌发周期长，萌发后属地下生配子体，需6-15年才能成熟。因此极大地限制了千层塔野生资源的再生。目前，石杉碱甲的提取主要依赖于野生资源，提取率仅为0.006％-0.1％。因此，市场对千层塔的需求量极大，迅速导致千层塔的自然资源处于灭绝的边缘。人们试图利用组织培养技术或者扦插的手段进行千层塔的快速繁殖，但是都进展缓慢。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种千层塔芽孢移栽成活率的方法，该方法能够显著提高千层塔芽孢移栽成活率，为千层塔的人工繁殖提供重要途径。

为了实现上述任务，本发明采取如下的技术解决方案：

一种提高千层塔芽孢移栽成活率的方法，该方法包括利用千层塔外植体获得千层塔伴生蕨原叶体，将千层塔伴生蕨原叶体转接到青苔基质中培养得到千层塔芽孢移栽青苔基质，再利用千层塔芽孢移栽青苔基质进行千层塔芽孢的移栽培养。

具体的，所述的千层塔外植体包括千层塔叶片或千层塔茎。

更具体的，所述的青苔基质为干青苔饱和吸水后得到的青苔。

进一步的，所述的利用千层塔外植体获得千层塔伴生蕨原叶体包括：取千层塔外植体灭菌后接种到MS固体培养基上培养直至生长出千层塔伴生蕨原叶体，培养环境温度为28℃，培养环境光照强度为1000Lux，培养光周期为12小时。

更进一步的，千层塔芽孢移栽青苔基质的获得包括：将体积为0.3～0.5cm³的千层塔伴生蕨原叶体转接到青苔基质上培养，一周后将青苔基质用含有聚乙烯吡咯烷酮的MS培养液填充饱和后继续培养，培养环境湿度为60％～75％，培养环境温度25℃，培养环境光照强度为2000Lux，培养光周期为8小时，继续培养三个月后即得千层塔芽孢移栽青苔基质。

具体的，所述的含有聚乙烯吡咯烷酮MS培养液中聚乙烯吡咯烷酮的浓度为50～150mg/L。

另外，利用千层塔芽孢移栽青苔基质进行千层塔芽孢的移栽培养包括：将千层塔芽孢移栽青苔基质用抗坏血酸溶液喷施饱和后移栽千层塔芽苞，再用含有吲哚丁酸的MS培养液喷施饱和千层塔芽孢移栽青苔基质进行千层塔芽孢的培养，培养环境湿度为60％～75％，培养环境温度为25℃，培养光照强度为2000Lux，培养光周期8小时。

具体的，所述的抗坏血酸溶液的浓度为150～250mg/L。

更具体的，含有吲哚丁酸的MS培养液中吲哚丁酸浓度为2～4mg/L。

本发明的特点是：

1)利用千层塔植株进行千层塔伴生蕨原叶体的培养，千层塔伴生蕨原叶体生长过的青苔基质培养芽孢。在自然生境中伴生蕨本身是和千层塔伴生的植物，在长期的生存过程中形成了其共有的促进生长的物质基础。本发明巧妙的利用千层塔伴生蕨原叶体生长过的青苔来栽培千层塔芽孢，芽孢因为利用伴生蕨生长过程中分泌的物质而促其生长；

2)利用聚乙烯吡咯烷酮、抗坏血酸和吲哚乙酸处理青苔，明显提高了千层塔芽孢的移栽效率；

3)无论是用千层塔的叶片还是用千层塔的茎培养获得的伴生蕨的原叶体，对千层塔芽孢的移栽差异不大。最佳的参数是：聚乙烯吡咯烷酮的浓度为100mg/L，抗坏血酸的浓度为200mg/L，抗坏血酸的浓度为3mg/L。在这样的条件下，千层塔芽孢的移栽成活率达到96％。

附图说明

图1为本发明的提高千层塔芽孢移栽成活率的具体操作流程图；

以下结合说明书附图和具体实施方式对本发明做具体说明。

具体实施方式