[发明专利]一种提高精液低温/冷冻保存品质的精液稀释液及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及畜牧领域，具体地说，涉及一种提高精液低温/冷冻保存品质的精液稀释液及其应用。

背景技术

精液低温冷冻保存技术能充分利用优良种畜的遗传资源，迅速扩大畜群的良种比例。同时，此技术也是治疗哺乳动物不孕症的有效辅助手段。精液稀释液是精子的保护剂，对精液保存的效果有重要的影响。哺乳动物常用的精液稀释液类型有柠檬酸一糖一卵黄类稀释液，加抗氧化剂的蔗糖类稀释液和奶类稀释液。无论使用哪种类型的精液稀释液，它们一般都应由维持渗透压物质、抑菌物质、防冻保护剂或低温保护剂等组成。其中，防冻保护剂(甘油、二甲基亚砜、卵黄和糖类)是精子在超低温冷冻时起保护作用的，低温保护剂(糖类、奶类)是将精液降温至4℃时对精子起保护作用的。

目前，马的精液保存主要采用低温和超低温冷冻保存。精液低温保存可以在4℃条件下保存72h以上，48小时内输精后的情期受胎率与鲜精无明显差异，48小时以后输精后的情期受胎率由于精子活力下降会明显降低。超低温冷冻保存通常是将精液保存至0.5mL或0.25mL塑料细管中来实现冷冻保存的，解冻后精子的直线前进运动率在45％左右，利用冷冻精液进行人工输精，马科动物的受胎率明显低于鲜精和液态保存精液，原因是冷冻解冻后的精了活力降低，能保持受精能力的有效精子数量明显下降。

近几年，子宫角深部输精和内窥镜输精等低剂量输精技术在生产中应用，进一步对精液的保存效果提出了更高的要求。因此，提高冻精活力，延长精子体外存活时间是畜牧生产和科学研究所必需的。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种提高精液低温/冷冻保存品质的精液稀释液及其应用。

为了实现本发明目的，本发明的技术方案如下：

第一方面，本发明提供一种提高精液低温/冷冻保存品质的精液稀释液，其含有40～60μM的BAPTA-AM，优选50μM。

本发明经研究发现，BAPTA-AM可有效的提高精液的低温保存质量及冷冻保存并解冻后的精液品质。

进一步地，当用于低温保存时，所述精液稀释液包括：低温保存液、BAPTA-AM和抑菌物质；所述低温保存液以200mL计，含有如下成分：葡萄糖5.00g、乳糖0.300g、棉子糖0.300g、柠檬酸钠0.060g、柠檬酸钾0.082g、HEPES试剂0.238～1.192g、蒸馏水100mL、灭菌脱脂奶100mL；所述抑菌物质为：青霉素10～20万IU、链霉素10～20万IU。

在上述配方下等比例扩大或缩小均属于本发明的保护范围。

作为优选，所述低温保存液以200mL计，含有如下成分：葡萄糖5.00g、乳糖0.300g、棉子糖0.300g、柠檬酸钠0.060g、柠檬酸钾0.082g、HEPES试剂0.952g，蒸馏水100mL、灭菌脱脂奶100mL；所述抑菌物质为：青霉素20IU、链霉素20万IU。

进一步地，当用于冷冻保存时，所述精液稀释液包括：冷冻保存液、BAPTA-AM和抑菌物质；所述冷冻保存液以200mL计，含有如下成分：葡萄糖4.5g、乳糖0.27g、棉子糖0.27g、柠檬酸钠0.054g、柠檬酸钾0.0738g、HEPES试剂0.2142～1.0728g、90mL蒸馏水、灭菌脱脂奶90mL、无菌甘油5～10mL、卵黄5～10mL；所述抑菌物质为：青霉素10～20万IU、链霉素10～20万IU。

作为优选，所述冷冻保存液以200mL计，含有如下成分：葡萄糖4.5g、乳糖0.27g、棉子糖0.27g、柠檬酸钠0.054g、柠檬酸钾0.0738g、HEPES试剂0.8568g、90mL蒸馏水、灭菌脱脂奶90mL、无 菌甘油10mL、卵黄10mL；所述抑菌物质为：青霉素20万IU、链霉素20万IU。

第二方面，本发明提供一种提高精液低温/冷冻保存品质的方法，使用前述精液稀释液对精液进行低温保存或冷冻保存。

所述低温保存具体为：精液采集去除胶状物，检测精液的活率、体积、密度后。低速离心弃上清，根据精液密度及输精要求，利用37℃权利要求3或4所述的精液稀释液稀释精液，马精子密度正常为150-300×10⁶个/ml，1单位体积精液离心弃上清后可使用1-4倍体积的37℃精液稀释液稀释，之后用5cm厚的脱脂棉包裹严密，放置于4度低温保存。