[发明专利]模式生物藻测定农药水分散粒剂毒性的方法

权利要求书

1.一种模式生物藻测定农药水分散粒剂毒性的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、试验药液的配制：

配制BG11培养基稀释液：其制备方法为：依次取10mL浓度为15.0g/100mL的NaNO₃、10mL浓度为2.0g/500mL的K₂HPO₄、10mL浓度为3.75g/500mL的MgSO₄·7H₂O、10mL浓度为1.8g/500mL的CaCl₂·2H₂O、10mL浓度为0.3g/500mL的C₆H₈O₇、10mL浓度为0.3g/500mL的FeC₆H₅O₇·NH₄OH、10mL浓度为0.05g/500mL的EDTANa₂、10mL浓度为1.0g/500mL的Na₂CO₃、1mL浓度为2.86g/L的H₃BO₃、1mL浓度为1.86g/L的MnCl₂·4H₂O、1mL浓度为0.22g/L的ZnSO₄·7H₂O、1mL浓度为0.39g/L的Na₂MoO₄·2H₂O、1mL浓度为0.08g/L的CuSO₄·5H₂O、1mL浓度为0.05g/L的Co(NO₃)₂·6H₂O，转移至1000mL容量瓶中，并用蒸馏水定容至1000mL，在121℃下高压灭菌15min，密封并贴好标签，4℃冰箱保存，有效期2个月；将上述BG11培养基用蒸馏水稀释10倍后即为BG11培养基稀释液；

称取30％茚虫威水分散粒剂0.1667g，以BG11培养基稀释液溶解并定容至100mL容量瓶，得到浓度为500mg a.i./L的储备液，依次移取储备液0.960、2.400、6.00、15.00、37.50mL，分别用BG11培养基稀释液定容至250mL容量瓶中，配制成浓度为1.92、4.80、12.0、30.0、75.0mg a.i./L的2倍药液；

S2、藻稀释液的配制：用血球计数法测定羊角月芽藻藻原液的细胞浓度为4.00×10⁶，并用无菌水稀释100倍，细胞浓度为4.00×10⁴个/mL；

S3、染毒：

实验组：取步骤S1中配制的梯度浓度的实验药液50mL分别加入步骤S2中50mL的藻稀释液，得到梯度浓度的生物藻用培养基；试验中藻起始浓度为2.00×10⁴个/mL；

空白对照组：取50mL藻稀释液与50mL BG11培养基稀释液混匀；

分别将实验组和空白对照组的生物藻用培养基装入三角瓶中，用锡箔纸封口，并置于智能人工气候箱中培养，控制在光照条件下放置16h，黑暗环境下放置8h；每天白天每隔2小时摇动1次，共摇动5次；

S4、试验数据记录：

测得试验期间各浓度组的水温为21.9℃～22.8℃，pH值为6.86～7.20，培养箱中的光照强度为5000Lx～6100Lx；染毒后48h、72h受抑制藻液细胞体积变小，观察并记录染毒后0h、24h、48h、72h藻细胞生物反应效应，包括藻细胞的抑制率和藻细胞的中毒情况；所述藻细胞的中毒情况包括：藻细胞畸形、藻液变白、藻细胞体积变小、藻细胞粘连或聚结；

S5、数据处理：

采用统计软件SPSS12.0，以药剂浓度的对数值为自变量x，以校正后的抑制率的机率值为因变量y，建立毒力回归方程；计算该供试物对藻类生长抑制的半数效应浓度EC₅₀和95％置信限；

S6、结果评价：

根据EC₅₀值判断农药毒级；农药对藻类的生长抑制毒性按72h后EC₅₀的大小划分为三个等级：高毒：EC₅₀≤0.300mg a.i./L；中毒：0.300mg a.i./L＜EC₅₀≤3.00mg a.i./L；低毒：EC₅₀＞3.00mg a.i./L。