[发明专利]一种用于筛选防治灰霉病和菌核病的木霉菌株的培养基

权利要求书

1.一种用于筛选防治灰霉病和菌核病的木霉菌株的培养基，其特征 在于，所述用于筛选防治灰霉病和菌核病的木霉菌株的培养基为含有 草酸的PDA培养基和含有草酸的PD培养液。

2.根据权利要求1所述的一种用于筛选防治灰霉病和菌核病的木霉 菌株的培养基，其特征在于，PDA培养基中草酸含量为20-30mmol/L。

3.根据权利要求1所述的一种用于筛选防治灰霉病和菌核病的木霉 菌株的培养基，其特征在于，PD培养液中草酸含量为20-30mmol/L。

4.使用如权利要求1所述的用于筛选防治灰霉病和菌核病的木霉菌 株的培养基筛选木霉菌株的方法，其特征在于，包括两步：

第一步将活化的待筛木霉菌株置于含有20-30mol/L草酸的PDA培养 基上，设不添加草酸的PDA中培养的对应木霉菌株为对照，在恒温条 件下培养3d；通过测量生长半径计算木霉菌株的草酸耐受率，选择 草酸耐受率大于20％的菌株进行第二步；

第二步将第一步筛选的菌株活化后置于含有20-30mmol/L草酸的PD 培养液中，设不接种木霉的含有20-30mmol/L草酸的PD培养液为对 照，在恒温恒定转速条件下培养12d；用pH计分别检测处理和对照 组的培养滤液的pH，计算处理和对照的pH差△pH，选择△pH大于2 的菌株。

5.根据权利要求4所述的筛选木霉菌株的方法，其特征在于，第一 步具体为：

(1)活化待筛木霉菌株；

(2)配制含30mmol/L草酸的PDA培养基；

(3)将活化的木霉菌株菌块置于含有30mmol/L草酸的PDA培养基 上，设不添加草酸的PDA培养的对应木霉菌株为对照，设三次重复；

(4)25℃培养箱中，暗培养72hr；

(5)测量接种菌饼的中心点到菌落边缘的距离，其中在菌落边缘选 5个点，分别测量半径并计算平均值；

(6)分别计算处理组和对照组的菌落半径平均值，和木 霉的草酸耐受率计算公式为

(7)筛选草酸耐受率>20％的菌株。

6.根据权利要求5所述的筛选木霉菌株的方法，其特征在于，第二 步具体为：

(1)配制含30mmol/L草酸的PD培养液；

(2)取第一步中筛选得到的木霉菌株，活化至产孢；

(3)配制浓度为10⁷cfu/mL的分生孢子悬浮液；

(4)将含有30mmol/L草酸的PD培养液分装在500mL三角摇瓶中， 每瓶100mL；

(5)取100μL木霉分生孢子悬浮液，在无菌条件下接种到每个摇瓶 中，以不接菌的草酸PD培养液、培养液中添加100μL含0.01％triton 的无菌水为对照，设三次重复；

(6)将摇瓶置于25℃摇床中160r/min振荡培养12d；

(7)培养结束后，培养混合物经灭菌滤纸抽滤得到澄清的滤液，使 用pH酸度计分别测定处理组和对照组的pH，计算△pH＝pH处理-pH对 照；

(8)筛选△pH>2的菌株。

7.根据权利要求4所述的筛选木霉菌株的方法，其特征在于，所述 的待筛木霉菌株为

8.根据权利要求5所述的筛选木霉菌株的方法，其特征在于，经该 方法筛选的菌株不必进行平板对峙、酶活检测、抗生物质检测等实验 室检测过程，直接用于田间病害防治的验证。