[发明专利]用于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测的分子信标探针、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种用于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测的分子信标探针，其特征在于：所述分子 信标探针包含BeaconMRSA1、BeaconMRSA2和BeaconMRSA3三种探针；所述BeaconMRSA1 的碱基序列如SEQIDNO:1所示，所述BeaconMRSA2的碱基序列如SEQIDNO:2所示，所述 BeaconMRSA3的碱基序列如SEQIDNO:3所示；所述BeaconMRSA1、BeaconMRSA2和Beacon MRSA3的5’端均标记有荧光基团，BeaconMRSA1、BeaconMRSA2和BeaconMRSA3的3’端均标 记有猝灭基团。

2.如权利要求1所述的用于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测的分子信标探针，其特征 在于：所述荧光基团为CY3，猝灭基团为BHQ1或者所述荧光基团为FAM，猝灭基团为TANRA。

3.一种含有如权利要求1或2所述分子信标探针的用于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检 测的试剂盒。

4.如权利要求3所述的用于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测的试剂盒，其特征在于：所 述试剂盒还包括杂交液和洗涤液。

5.如权利要求4所述的用于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测的试剂盒，其特征在于：所 述杂交液含有硫酸葡聚糖、NaCl、去离子甲酰胺、Na₂EDTA、TritonX-100和Tris-HCl缓冲溶 液；所述洗涤液含有Tris、NaCl、TritonX-100和十二烷基硫酸钠，洗涤液的pH值为6～10。

6.如权利要求5所述的用于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测的试剂盒，其特征在于：所 述去离子甲酰胺的浓度为10～40％(v/v)。

7.如权利要求6所述的用于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测的试剂盒，其特征在于：所 述杂交液含有以下组分：1～10％(w/v)硫酸葡聚糖，100～1000mmol/LNaCl，10～40％(v/ v)去离子甲酰胺，5mmol/LNa₂EDTA，0.01～1％(v/v)TritonX-100和5～200mMTris-HCl缓 冲溶液,Tris-HCl缓冲溶液的pH值为7.5；所述洗涤液含有以下组分：5～50mmol/LTris，10 ～100mmol/LNaCl，0.01～0.2％(v/v)TritonX-100和0.01～0.2％(v/v)十二烷基硫酸 钠。

8.如权利要求3～7任一项所述的用于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测的试剂盒，其特 征在于：所述分子信标探针中，BeaconMRSA1、BeaconMRSA2和BeaconMRSA3的浓度均为 10ng/μL。

9.一种采用如权利要求4所述试剂盒检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的方法，其特征 在于：包括以下步骤：

(1)吸取样品滴在玻片上，烘干，使样品中的细菌固定在玻片上；

(2)将玻片浸入无水乙醇中，浸泡；

(3)在样品上加入杂交液和分子信标探针，置于荧光原位杂交仪上进行杂交；

(4)用洗涤液洗涤；

(5)烤干后滴加封片剂，用荧光显微镜镜检，用物镜扫视和计数，并观察细菌形态。

10.如权利要求9所述的检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于：所述步 骤(3)中，置于荧光原位杂交仪上进行杂交的温度为42～58℃。