[发明专利]一种MDCK细胞无血清培养基及其用途和制备

说明书

技术领域

本发明涉及生物、医学领域，具体地是涉及一种MDCK细胞的无血清培养基及其用途和制备。

背景技术

MDCK细胞系(MDCKCellLines)中文名称为“犬肾细胞”是由Madin和Darby于1958年从美国CockerSpaniel母曲架犬的肾脏组织分离培育建立，通常是以贴壁方式生长的上皮样细胞。目前，MDCK细胞系(MDCKCellLines)广泛用于多种病毒的扩增和纯化，如：正粘病毒科、副粘病毒科、披膜病毒科、疱疹病毒科、弹状病毒科、逆转录病毒科、呼肠孤病毒科、黄病毒科、腺病毒科、小RNA病毒科、沙粒病毒科和痘病毒科的多种病毒。由于其病毒感染效率高、增殖快，且不易变异，MDCK细胞系(MDCKCellLines)被公认为最适于甲、乙型流感病毒疫苗生产的3种细胞系之一。传统的MDCK细胞培养大多采用有血清贴壁培养方式。血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种复杂混合物，其含有细胞生长所需的生长因子、激素、载体蛋白、贴壁因子、微量元素以及其他营养物质，可以有效地促进细胞生长和产物表达。然而，血清的应用也存在许多问题：易受病毒、支原体或其他病原体的污染；批间差异造成产品批次间的质量难以严格控制；大量血清蛋白的存在增加了下游分离纯化的难度，部分蛋白难以通过分离纯化手段彻底去除，影响了产品的最终质量；此外，血清来源困难、价格昂贵，大规模动物细胞培养过程中使用血清将会大大增加生产成本。目前还有MDCK细胞使用某些培养基在传代多次后会出现致瘤性，这样会导致疫苗生产的安全性降低。

MDCK细胞系广泛用于流感病毒的分离，目前的流感病毒分离包括以下步骤：

i)在培养基中增殖MDCK细胞；

ii)用流感病毒样本感染MDCK细胞；

iii)继续培养，分离在MDCK细胞中复制的病毒。

能否快速获得纯度高、滴度高的流感病毒是找出致病因、控制流感疫情中非常重要的一个环节，因此尽早分离出流感病毒意义重大。在第i)步中，现有的添加血清培养基培养MDCK细胞分离流感病毒的周期较长，难以满足流感疫情中快速确定病原物的需要。

本发明就是在此基础上研究获得的能够克服上述缺陷的培养基。

发明内容

本发明将提供一种能提高MDCK细胞增殖速度和快速收获流感病毒的培养基。

本发明提供一种MDCK细胞培养基，其特征在于包括如下成分：甘氨酸、L-精氨酸盐酸盐、L-天冬酰胺、L-天冬氨酸、L-胱氨酸盐酸盐、L-谷氨酰胺、L-谷氨酸、L-组氨酸盐酸盐、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸盐酸盐、L-甲硫氨酸、L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-缬氨酸、生物素、氯化胆碱、D-泛酸钙、叶酸、烟酰胺、对氨基苯甲酸、盐酸吡哆醇、盐酸吡哆醛、核黄素、硫胺素盐酸盐、维生素B12、肌醇、硝酸钙(4水)、硫酸镁(7水)、氯化钾、碳酸氢钠、氯化钠、磷酸氢二钠、葡萄糖、还原型谷胱甘肽(还原型)、HEPES、酚红钠盐。

进一步，其还包括如下成分：硫酸铜(5水)、硝酸铁(9水)、硫酸亚铁(7水)、氯化镁(无水)、硫酸锌(7水)、磷酸二氢钠(1水)、丙酮酸钠、腐胺盐酸盐、白蛋白。