[发明专利]一种草坪币斑病菌的分离方法

权利要求书

1.一种草坪币斑病菌的分离方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）、病样采集：切取具有典型币斑病症状的病健交接处植株及土壤样本作为病样；

（2）、病样保湿培养：将步骤（1）获得的病样保湿培养2-3天，培养条件为22-25℃光照16h/18-20℃黑暗8 h交替培养；

（3）、病原菌分离：使用接种针挑取经过保湿培养后在病样表面长出的细丝状菌丝，置于APDA培养基上，22-25℃黑暗条件培养2-3 d；

（4）、病原菌纯化：待气生菌丝长出后，切取菌落边缘的菌丝尖端，转入新的APDA培养基上，22-25℃黑暗条件培养3-5 d，得到目的病原菌。

2.根据权利要求1所述的草坪币斑病菌的分离方法，其特征在于步骤（1）中，病样采集工具为土壤取样器。

3.根据权利要求1所述的草坪币斑病菌的分离方法，其特征在于步骤（1）中，所述的土壤样本的直径为4-5 cm、高度为6-10 cm。

4.根据权利要求1所述的草坪币斑病菌的分离方法，其特征在于步骤（1）中，所述的病样装入信封中，20-30℃温度下运输至实验室，置于4℃冰箱中保存。

5.根据权利要求1所述的草坪币斑病菌的分离方法，其特征在于步骤（2）中，将病样置于经过灭菌处理的花盆或穴盘中，喷施无菌水使病样湿度不低于80%，使用封口膜密封后将病样置于光照培养箱中进行保湿培养2-3 d，培养条件为22-25℃光照16 h/18-20℃黑暗8h交替培养。

6.根据权利要求 5所述的草坪币斑病菌的分离方法，其特征在于所述的花盆或穴盘在80 ℃下烘干2 h进行灭菌处理。

7.根据权利要求1所述的草坪币斑病菌的分离方法，其特征在于步骤（3）中，使用接种针挑取草坪草或土壤表面经过保湿培养后长出的细丝状菌丝，置于APDA培养基上培养。

8.根据权利要求1所述的草坪币斑病菌的分离方法，其特征在于所述的APDA培养基的制备方法为：称取马铃薯200 g，削皮切块后置于去离子水中加热煮沸20 min，用双层纱布过滤收集滤液后定容到1 L，加入15 g琼脂和18 g葡萄糖混匀后，121℃湿热灭菌20 min，待培养基温度降至55-60℃，调节培养基的pH为3.8-4.2。

9.根据权利要求1所述的草坪币斑病菌的分离方法，其特征在于感病植物为草地早熟禾、匍匐剪股颖、海滨雀稗。