[发明专利]一种泛三甲基化抗体及其制备方法有效
申请号: | 201610166901.7 | 申请日: | 2016-03-23 |
公开(公告)号: | CN105713090B | 公开(公告)日: | 2022-04-12 |
发明(设计)人: | 蓝斐;沈宏杰;徐文绮 | 申请(专利权)人: | 复旦大学 |
主分类号: | C07K16/18 | 分类号: | C07K16/18;C07K16/06 |
代理公司: | 上海正旦专利代理有限公司 31200 | 代理人: | 陆飞;盛志范 |
地址: | 200433 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 甲基化 抗体 及其 制备 方法 | ||
1.一种泛三甲基化抗体的制备方法,其特征在于具体步骤为:
直接用免疫抗原偶联载体蛋白,包括牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白或牛甲状腺球蛋白,作为免疫抗原前提底物,用烷基化试剂(2-溴乙基)-三甲基溴化铵通过化学修饰把载体蛋白中的半胱氨酸进行烷基化修饰模拟成三甲基化修饰赖氨酸,记为Kc[me3];
再以这个富含模拟的三甲基化修饰赖氨酸的载体蛋白Kc[me3]作为免疫抗原,免疫兔子,得到特异识别三甲基化蛋白的血清抗体。
2.根据权利要求1所述的泛三甲基化抗体的制备方法,其特征在于具体操作流程如下:
(1)取10-50mg载体蛋白溶解到烷基化试剂中,烷基化试剂的主要成分为:4-羟乙基哌嗪乙磺酸、 盐酸胍、L-甲硫氨酸;
(2)加入1-10mg二硫苏糖醇,进行反应;
(3)加入10倍载体蛋白量的(2-溴乙基)-三甲基溴化铵,进行烷基化反应;
(4)补加1-10mg二硫苏糖醇,继续避光烷基化反应;
(5)加入20-100ul 14.2M巯基乙醇终止反应,得到模拟三甲基化修饰的载体蛋白Kc[me3];
(6)取0.1-1mg载体蛋白Kc[me3]免疫兔子,得到血清抗体,即泛三甲基化抗体。
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