[发明专利]鸡杆菌的检测引物和探针体系及其检测方法在审
| 申请号： | 201610166321.8 | 申请日： | 2016-03-22 |
| 公开（公告）号： | CN105695597A | 公开（公告）日： | 2016-06-22 |
| 发明（设计）人： | 皇甫和平;许文博;孙彦婷;王宏魁;董青;郭宏伟;李云霞;高文文 | 申请（专利权）人： | 河南牧业经济学院 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/06;C12N15/11;C12R1/01 |
| 代理公司： | 河南科技通律师事务所 41123 | 代理人： | 樊羿;韩松 |
| 地址： | 450011 河*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 杆菌 检测 引物 探针 体系 及其 方法 | ||
1.一种鸡杆菌的检测引物和探针体系，其特征在于，包括以下序列：
Primer-F：atgggacattctatcgcaaacc，
Primer-R：aacggcggtagaggcattag，
Probe_IN：FAM-tgttaatacaagtagcgggaaagcggc-TAMRA。
2.一种鸡杆菌的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）常规方法提取样品DNA；
（2）合成如SEQIDNO：4所示的gtxA基因部分片段，并通过SmaI位点克隆至pUC57质粒 中；并设计若干个稀释度的重组质粒作为标准品的模板，利用权利要求1所述检测引物和 探针体系分别进行荧光定量PCR扩增，根据结果进行分析，建立标准曲线或得到标准曲线方 程；
（3）以重组质粒为阳性对照，超纯水为阴性对照，对样品DNA进行鸡杆菌荧光定量PCR检 测。
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于：所述若干个稀释度为2.53×106、2.53 ×105、2.53×104、2.53×103、2.53×102拷贝/μL5个浓度梯度。
4.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于：所述荧光定量PCR的反应体系25μL： Primer-F1μL、Primer-R1μL、Probe_IN0.5μL、ROXReferenceDye21μL、模板DNA1μL、 灭菌超纯水20.5μL。
5.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于：所述荧光定量PCR的反应程序为：95℃ 5min、95℃10s、60℃34s，重复40个循环。
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