[发明专利]掺杂荧光标记生物高聚物及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种掺杂荧光标记生物高聚物，其特征在于，由以下部分组成：

生物高聚物；以及

多种荧光素，

其中，所述多种荧光素中的每一种各自独立地与所述生物高聚物偶联，且所述多种荧光素被选择为适于发生荧光共振能量转移，

任选地，所述生物高聚物为蛋白质、多肽、核酸或多糖。

2.根据权利要求1所述的掺杂荧光标记生物高聚物，其特征在于，所述多种荧光素中的每一种均不为荧光蛋白。

3.根据权利要求1所述的掺杂荧光标记生物高聚物，其特征在于，所述多种荧光素中的每一种均为小分子荧光素。

4.根据权利要求1所述的掺杂荧光标记生物高聚物，其特征在于，所述多种荧光素中的每一种各自独立地具有选自异硫氰酸基、琥珀酰亚胺基、氟化苯基、硫代琥珀酰亚胺基、硫代四氟化苯基和氯化磺酰基的至少一种活性基团。

5.根据权利要求4所述的掺杂荧光标记生物高聚物，其特征在于，所述多种荧光素中的每一种各组独立地选自Cyanine类荧光素和罗丹明类荧光素的至少一种，

任选地，Cyanine类荧光素为选自Cyanine3，Cyanine3.5，Cyanine5，Cyanine5.5和Cyanine7的至少一种，

任选地，罗丹明类荧光素为选自FITC，TRITC，Rhodamine B，Rhodamine 101，Rhodamine110，Rhodamine 123，Rhodamine 700，Rhodamine 800和Rhodamine 6G的至少一种，

任选地，所述生物高聚物为抗人CD4单克隆抗体或抗人CD3单克隆抗体，

任选地，所述多种荧光素为FITC和Cyanine5，

任选地，所述多种荧光素为Cyanine3和Cyanine5，

任选地，所述多种荧光素为FITC和Rhodamine B，

任选地，所述多种荧光素为FITC、Rhodamine B和Cyanine5。

6.一种制备掺杂荧光标记生物高聚物的方法，其特征在于，包括：

将多种荧光素与待标记生物高聚物混合，以便获得所述掺杂荧光标记生物高聚物，

其中，所述多种荧光素被选择为适于发生荧光共振能量转移。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，包括：

在4℃-35℃的温度下，将所述多种荧光素与所述待标记生物高聚物混合，并使所得到的混合物反应10分钟～4小时，

任选地，在15℃-30℃的温度下，将所述多种荧光素与所述待标记生物高聚物混合，并使所得到的混合物反应20分钟-2小时。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述混合是在pH为7.0～10.0的溶液中 进行的，优选地，所述溶液的pH为8.5～9.5。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述待标记生物高聚物被预先溶解在缓冲液中，所述缓冲液的pH为7.0～10.0，优选8.5～9.5，

其中，所述缓冲液为选自磷酸钠缓冲液、碳酸钠缓冲液、硼酸缓冲液的至少之一。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述待标记生物高聚物在溶解得到的混合溶液中的浓度为3-7mg/mL，优选5mg/mL，

任选地，所述多种荧光素中的每一种与所述待标记生物高聚物的摩尔比为2:1-200:1，优选5:1-50:1。

11.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述多种荧光素中作为荧光供体的荧光素与作为荧光受体的荧光素的摩尔比为1:50-50:1，优选1:20-20:1，

任选地，所述待标记生物高聚物为抗人CD4单克隆抗体或抗人CD3单克隆抗体，

任选地，所述多种荧光素为FITC和Cyanine5，

任选地，所述多种荧光素为Cyanine3和Cyanine5，

任选地，所述多种荧光素为FITC和Rhodamine B，

任选地，所述多种荧光素为FITC、Rhodamine B和Cyanine5。