[发明专利]梨渣固态发酵生产多粘类芽孢杆菌微生物菌剂的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种梨渣固态发酵生产多粘类芽孢杆 菌微生物菌剂的方法。

背景技术

中国是梨树种植大国，年产鲜梨约1600万吨。随着种植面积及产量的不断 增加，梨的深加工成为采后增值的重要途径之一。梨汁是目前梨果加工的主要 产品之一。在梨汁加工过程中产生大量的梨渣，其总量约为原果重量的40％～ 50％。以年产10000吨天然梨汁工厂为例，其每年扔掉的梨渣达2000～3000吨。 梨渣中存在大量的石细胞，由于适口性较差而不能用作饲料，目前基本上作为 废料弃丢，不仅污染环境，还造成资源浪费。

多粘类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa)是芽孢杆菌科(Bacillaceae) 类芽孢杆菌属(Paenibacillus)的革兰氏阳性细菌，又称多粘芽孢杆菌，对人 或动植物没有致病性。多粘芽孢杆菌是一种植物根际促生细菌，可产生多肽抗 生素、拮抗蛋白、酶、植物激素等多种生理活性物质，一方面可以用作微生物 肥料，促进植物生长、提高作物产量；另一方面，可以有效防治植物细菌性和 真菌性土传病害，对植物青枯病、番茄枯萎病、油菜腐烂病、黑松根腐病等多 种植物病害具有很好的防治效果。因此，多粘类芽孢杆菌是一种很好的生物防 治细菌，已被用于生物有机肥、微生物肥料和生物农药。

目前多粘类芽孢杆菌多采用液体深层发酵技术，再经喷雾干燥进行生产， 对设备要求高，生产工艺复杂。与之相比，固态发酵具有以下优点：培养基来 源广且价格低；使用的设备相对简单，能耗低；产物的产率较高；发酵过程不 排放废水，环境污染较少；生产成本远低于液体深层发酵。

多粘类芽孢杆菌的发酵培养方法有多种。例如，中国专利(公开号：CN 104099278A)中以稻壳、玉米粉、土豆和茶渣饼为主要原料，采用固态发酵培 养多粘类芽孢杆菌。中国专利(公开号：CN102559564B)中以可溶性淀粉和 蛋白胨为主要原料，采用液态发酵培养多粘类芽孢杆菌。中国专利(公开号： CN102249754A)中以甘薯淀粉废水为培养基，液态发酵生产多粘类芽孢杆菌 微生物肥料。中国专利(公开号：CN102618527A)中柠檬酸废水为主要培养 基原料，液态发酵生产多粘类芽孢杆菌微生物菌剂。以梨渣为主要原料，固态 发酵生产多粘类芽孢杆菌微生物菌剂的方法在国内外文献中均未见报道。

发明内容

本发明提供一种利用梨渣固态发酵生产多粘类芽孢杆菌微生物菌剂的方 法。所收获的微生物菌剂，其芽孢数达到167.3亿个/g，芽孢率达到96.5％。

发明所使用的菌株是一株高效拮抗多种植物病原菌、促进植物生长的多粘 类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa)KD101。

本发明采用以下技术方案予以实现：

先空

本发明与现有技术相比具有的有益效果为：

①本发明使用新鲜的梨渣作为发酵生产多粘类芽孢杆菌的主要原料，变废

为宝，降低了菌剂生产成本，减少了环境污染。

②所获得的多粘类芽孢杆菌微生物菌剂的芽孢数达到160～180亿个/g，芽

孢率达到97％～99％。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明。

实施例一：

鸭梨梨渣固态发酵生产多粘类芽孢杆菌微生物菌剂方法：

a、种子培养基的配制及灭菌：于1L水中，加入30g葡萄糖、10g蛋白 胨、5g酵母粉、4.5g磷酸二氢钾、2.0g碳酸钙。按照所述配比，将各种成 分称重后加入三角瓶中，室温下搅拌均匀，制得种子培养基；用8层纱布密封 后放入高压灭菌锅中，115℃灭菌15min。灭菌后把三角瓶冷却至室温。

b、种子液的制备：挑取斜面保藏的多粘类芽孢杆菌KD101菌种2～3环， 接种到步骤a中所述的种子培养基中，30℃、200rpm摇床振荡培养14h。

c、固态发酵培养基的配制及灭菌：于1000g新鲜鸭梨梨渣中，加入400g 小麦麸皮、20g豆粕粉、10g硝酸钠、8g硫酸锰、15g磷酸二氢钾。按照所述 配比，将各种成分称重后加入带有机械搅拌桨的卧式固态发酵罐中，室温下搅 拌均匀制得固态发酵培养基；然后向发酵罐通入蒸汽开始灭菌，待罐温上升到 115℃，保温15min，灭菌结束后，引入冷却水将发酵培养基温度降至25℃～ 30℃。