[发明专利]一种利用钩状效应拓展检测范围的生物芯片及其检测方法

权利要求书

1.一种非诊断目的利用钩状效应拓展检测范围的检测方法，其特征在于：该方法包括：

（1）组装生物芯片，所述生物芯片包括至少一个靶标区，所述靶标区内固定有捕获抗体，所述捕获抗体与分析物复合，通过与分析物复合的标记抗体产生可检测的信号，用于样品中分析物的定量分析；

至少一个指示区，所述指示区内固定有抗原；所述固定抗原不与分析物复合，而与未复合分析物的标记抗体复合，产生可检测的信号，用于判定是否发生了钩状效应；

（2）标准曲线的绘制：将一系列浓度的待测分析物标准品分别与标记抗体混合，形成混合溶液；该混合溶液流经步骤（1）所述的生物芯片，形成一反应体系；反应结束后，所述靶标区和指示区分别输出信号，根据分析物标准品的浓度和信号值分别拟合出靶标区的标准曲线A和指示区的标准曲线B，确定靶标区的标准曲线A中发生钩状效应时的临界分析物浓度及对应的指示区标准曲线B中的临界信号；

（3）将待测样品与标记抗体混合，形成二者的混合溶液；

（4）将该混合溶液流经步骤（1）所述的生物芯片，形成一反应体系；

（5）反应结束后，将指示区输出的信号与临界信号比对，判断是否发生钩状效应，从而使用靶标区的检测结果进行分析物定量。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述靶标区位于指示区的任意侧。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：靶标区用于固定捕获抗体的载体材料或指示区用于固定抗原的载体材料分别为单晶硅、玻璃、聚苯乙烯、金膜、硝化纤维、氟化聚乙烯、聚阳离子树脂、亲水性聚合物薄膜、多孔材料、树脂或硝化纤维树脂。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述标记抗体的标记物为带荧光、放射性、化学发光或显色基团的标记物。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述分析物为抗原性物质、半抗原或这些物质的组合。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤（5）中，当指示区信号高于所述临界信号时，钩状效应没有发生，使用靶标区的标准曲线A的上升段进行分析物定量；当指示区信号低于所述临界信号时，钩状效应发生，使用靶标区的标准曲线A的下降段进行分析物定量。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述信号值随分析物浓度变化关系的标准曲线使用四参数方程拟合，其中分析物浓度为横坐标，信号值为纵坐标。

8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于：所述四参数方程为：y = A₂ + (A₁-A₂)/(1 + (x/x₀)^p)。