[发明专利]一种检测二氯喹啉酸的试纸条及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及二氯喹啉酸的检测，具体是一种用于检测二氯喹啉酸的胶体金试纸条，其特别适用于植烟土壤中二氯喹啉酸残留的检测。

背景技术

二氯喹啉酸是由德国巴斯夫公司开发的新型喹啉酸类激素型除草剂，具有选择性强和持效期长的特点。二氯喹啉酸在一年生杂草和禾本科作物之间有明显的选择性，可用于秧前和秧后的水稻田或直播水稻田的杂草防除，是我国稻田主要除草剂品种之一。由于二氯喹啉酸显酸性，在酸性土壤中降解缓慢，容易给后茬敏感作物造成严重危害，特别在水稻与烟草轮作地区，可造成烟草生长畸形。伴随二氯喹啉酸应用量的逐年增长，应用范围的逐年扩大，由于不合理的使用而导致农作物产生药害的事件也常有发生。在实际应用中，水稻田施用二氯喹啉酸后，经过半年的降解，二氯喹啉酸仍会有相当累积。水稻田施用二氯喹啉酸后的近300天内，除水稻外，不能种植任何作物；两年内不能种植烟草、茄子、番茄、胡萝卜、芹菜等作物，不能用施过二氯喹啉酸的水灌上述作物。为了缓解因土壤残留二氯喹啉酸而致烟草畸形生长，减少由此而造成的经济损失，种植前检测植烟土壤中二氯喹啉酸的含量显得尤为重要。

目前常用的二氯喹啉酸检测方法主要是仪器方法，如高效液相色谱法，采用这些分析方法需要昂贵的仪器和专门的技术人员，样品前处理过程复杂且花费高、费时长，难以满足大量样品和现场样品快速检测的需要。因此，开发一种不受检测设备限制并且能够实现对大批量样品进行快速检测的产品和方法成为迫切需要解决的问题。

发明内容

本发明的目的在于克服现有的检测二氯喹啉酸的方法存在的对设备依赖性高，并且不能够实现对大批量样品的快速检测的特点，提供一种操作简单、灵敏度高、检测速度快、成本低、不受检测设备限制的试纸条及其制备方法和应用，以实现对大批量样品进行快速检测和现场监控。

为了实现本发明的目的，本发明提供了一种检测二氯喹啉酸的试纸条，该试纸条包括样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫和底板；其中，所述反应膜上具有包被有二氯喹啉酸半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线，所述结合物释放垫上喷涂有二氯喹啉酸单克隆抗体-胶体金标记物；所述二氯喹啉酸半抗原-载体蛋白偶联物由二氯喹啉酸半抗原与载体蛋白偶联得到；所述二氯喹啉酸单克隆抗体是以二氯喹啉酸半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得。

所述载体蛋白可为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白。

所述二氯喹啉酸半抗原是由二氯喹啉酸与溴乙酰氯反应得到，其分子结构式为：

。

所述羊抗鼠抗抗体是以鼠源抗体为免疫原对山羊进行免疫制备获得。

所述样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫依次粘贴在底板上，所述结合物释放垫1/3~1/2被覆盖于样品吸收垫下。

所述底板可为PVC底板或其他硬质不吸水的材料；所述样品吸收垫可为吸滤纸或滤油纸；所述结合物释放垫可为玻璃棉或聚酯材料；所述吸水垫为吸水纸；所述反应膜可为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜。

一种制备上述试纸条的方法，包括以下步骤：

1）制备喷涂有二氯喹啉酸单克隆抗体-胶体金标记物的结合物释放垫；

2）制备具有包被有二氯喹啉酸半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线的反应膜；

3）将1）和2）制备好的结合物释放垫、反应膜与样品吸收垫、吸水垫和底板组装成试纸条。

具体地说，步骤包括：

1）二氯喹啉酸与溴乙酰氯反应，制备二氯喹啉酸半抗原；

2）将二氯喹啉酸半抗原与载体蛋白偶联，制备二氯喹啉酸半抗原-载体蛋白偶联物；

3）用二氯喹啉酸半抗原-载体蛋白偶联物免疫小鼠，将小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞通过融合、筛选，得到分泌二氯喹啉酸单克隆抗体的杂交瘤细胞株；

4）提取小鼠IgG免疫健康山羊，得到羊抗鼠抗抗体；

5）分别将二氯喹啉酸半抗原-载体蛋白偶联物和羊抗鼠抗抗体包被于反应膜的检测线（T）和质控线（C）上；

6）用柠檬酸三钠与氯金酸反应制备胶体金；

7）将制备的二氯喹啉酸单克隆抗体加入到制备的胶体金中，得到二氯喹啉酸单克隆抗体-胶体金标记物；

8）将二氯喹啉酸单克隆抗体-胶体金标记物喷涂在结合物释放垫上，37 ℃烘1 h后取出，置于干燥环境中保存备用；

9）将样品吸收垫用含0.5%牛血清白蛋白（质量分数）、pH 7.2的0.1 mol/L磷酸盐缓冲液浸泡2 h，37 ℃下烘干2 h；